【摘 要】
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目的 探索线粒体转录因子A (TFAM)表达下调对前列腺癌细胞去势抵抗性增殖的影响及其机制.方法 免疫组织化学染色法检测前列腺癌组织TFAM的表达,分析TFAM在雄激素抵抗性前列腺癌和雄激素敏感性前列腺癌组织中的表达差异及其对雄激素抵抗性前列腺癌进展的影响.采用小干涉RNA (siRNA)敲低雄激素敏感性LNCaP前列腺癌细胞中TFAM的表达,四唑氮衍生物MTS细胞增殖试验及集落形成实验检测TFAM对LNCaP细胞在雄激素剥夺培养基中存活及增殖的影响;实时定量PCR检测LNCaP细胞白细胞介素6(IL-6
【机 构】
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空军军医大学第二附属医院唐都医院泌尿外科,陕西西安710038;空军军医大学第一附属医院西京医院泌尿外科,陕西西安710032
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目的 探索线粒体转录因子A (TFAM)表达下调对前列腺癌细胞去势抵抗性增殖的影响及其机制.方法 免疫组织化学染色法检测前列腺癌组织TFAM的表达,分析TFAM在雄激素抵抗性前列腺癌和雄激素敏感性前列腺癌组织中的表达差异及其对雄激素抵抗性前列腺癌进展的影响.采用小干涉RNA (siRNA)敲低雄激素敏感性LNCaP前列腺癌细胞中TFAM的表达,四唑氮衍生物MTS细胞增殖试验及集落形成实验检测TFAM对LNCaP细胞在雄激素剥夺培养基中存活及增殖的影响;实时定量PCR检测LNCaP细胞白细胞介素6(IL-6)的mRNA表达,Western blot法和ELISA检测TFAM干涉后,前列腺癌细胞IL-6的分泌.siRNA干涉IL-6表达后,MTS及集落形成实验检测IL-6是否介导TFAM下调诱导的LNCaP细胞去势抵抗性增殖.线粒体DNA (mtDNA)标记试剂PicoGreen和线粒体标记试剂MitoTracker共染色及实时定量PCR检测TFAM干涉能否诱导mtDNA从线粒体外溢,DNA酶Ⅰ去除外溢至细胞质的mtDNA或者利用siRNA干涉Toll样受体9(TLR9)表达,确定IL-6表达及分泌是否受到影响.结果 与雄激素敏感性前列腺癌组织相比,在去势抵抗性前列腺癌组织中TFAM的表达显著降低,且TFAM表达越低的前列腺癌患者其进展为去势抵抗性前列腺癌的速度越快;敲低TFAM表达后,LNCaP细胞在雄激素剥夺性培养基中的存活及增殖能力显著增强的同时,IL-6的表达及分泌显著提高;敲低IL-6表达可显著抑制TFAM干涉导致的雄激素抵抗性增殖.敲低TFAM可导致LNCaP细胞的mtDNA外溢至细胞质;DNA酶Ⅰ处理或敲低TLR9可显著抑制TFAM干涉导致的IL-6表达及分泌升高.结论 敲低TFAM表达通过增强IL-6表达促进前列腺细胞的去势抵抗性增殖.
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