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目的
建立一种可同时检测禽流感病毒H9N2的HA和NA基因一步法双重荧光RT－PCR方法。
方法针对H9N2禽流感病毒的HA和NA基因保守区，设计相应的特异性引物以及探针，优化检测体系及反应条件，建立一步法双重荧光定量RT－PCR方法。对该方法的灵敏度、特异性、稳定性进行验证与评估，并对家禽粪便标本进行应用检测，以单重实时荧光RT－PCR方法作为参照，检测结果不一致的样本采用测序进行验证。
结果该方法特异性强，与H1、H3、H5、H7亚型禽流感病毒、鸡新城疫及鸡传染性支炎病毒均无交叉反应，对HA和NA基因的最低检出限分别可达50拷贝/μL和25拷贝/μL，组间与组内的变异系数在0.20～0.79%之间。对82份粪便标本进行检测，H9N2禽流感病毒的阳性率为8.14%(7/82)，与单重实时荧光RT－PCR法检测结果一致。
结论该方法特异性强、灵敏度高、稳定性好，可应用于临床禽流感样本的检测。