【摘 要】
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链球菌是引起奶牛乳房炎的重要病原菌，其中无乳链球菌（S.agalactiae）、停乳链球菌（S.dysgalactiae）和乳房链球菌（S.uberis）是奶牛乳房炎主要的致病性链球菌。为同时、快速地检测牛奶样品中这3种重要链球菌，本研究根据无乳链球菌sip基因、停乳链球菌Mig基因及乳房链球菌pauA基因设计特异性引物，同时以细菌16S rRNA基因为内参，建立了多重PCR检测方法，并进行条件优
【基金项目】
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上海市科技兴农农产品安全项目（2020-02-08-00-08-F01489）； 上海市科学技术委员会科研计划项目（21N31901000）； 兵团财政科技计划项目课题（2020AB025-03）； 中央级公益性科研院所基本科研业务费专项资金项目（2020JB07）；
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链球菌是引起奶牛乳房炎的重要病原菌，其中无乳链球菌（S.agalactiae）、停乳链球菌（S.dysgalactiae）和乳房链球菌（S.uberis）是奶牛乳房炎主要的致病性链球菌。为同时、快速地检测牛奶样品中这3种重要链球菌，本研究根据无乳链球菌sip基因、停乳链球菌Mig基因及乳房链球菌pauA基因设计特异性引物，同时以细菌16S rRNA基因为内参，建立了多重PCR检测方法，并进行条件优化。结果显示，该方法最佳退火温度为58℃，最佳扩增循环数为25个循环，本方法同时检测无乳链球菌、停乳链球菌及乳房链球菌时，检测限分别为1×10~3CFU/m L、1×10~3CFU/m L及1×104 CFU/m L，灵敏性高。该方法对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、肺炎克雷伯氏菌、单核细胞增生李斯特菌等10种菌均无交叉反应，特异性好。模拟样品结果显示，当奶样中3种菌的初始浓度均为1 CFU/m L时，37℃增菌6 h即可检出乳房链球菌，增菌8 h以上3种菌可全部检出。结果表明，该多重PCR检测方法具有较好的特异性和灵敏性，对同时快速检测牛奶中无乳链球菌、停乳链球菌及乳房链球菌具有重要意义，也为奶牛乳房炎的监管、诊治提供了技术支持。
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