【摘 要】
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目的:探讨尿源干细胞来源的外泌体（USC-Exo）对糖尿病性勃起功能障碍（DED）大鼠海绵窦内皮功能和勃起功能的改善作用，并探讨其作用机制。方法:通过超速离心法从USC的培养基中提取USC-Exo,并进行鉴定。将SD大鼠海绵窦内皮细胞（CCEC）分为4组：（1）正常组；（2）高糖组；（3）Exo组：高糖培养基中加入USC-Exo（10μg/ml）;（4）3-MA组：高糖培养基中加入USC-Exo（
【基金项目】
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国家自然科学基金青年基金项目（82001533）； 广东省基础与应用基础研究区域联合基金-青年基金项目（2020A1515111160）； 广东省自然科学基金面上项目（2021A1515010065）～～；
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目的:探讨尿源干细胞来源的外泌体（USC-Exo）对糖尿病性勃起功能障碍（DED）大鼠海绵窦内皮功能和勃起功能的改善作用，并探讨其作用机制。方法:通过超速离心法从USC的培养基中提取USC-Exo,并进行鉴定。将SD大鼠海绵窦内皮细胞（CCEC）分为4组：（1）正常组；（2）高糖组；（3）Exo组：高糖培养基中加入USC-Exo（10μg/ml）;（4）3-MA组：高糖培养基中加入USC-Exo（10μg/ml）和3-MA（2 mmol/L）。将mRFP-GFP-LC3腺病毒转染CCEC后在荧光显微镜下检测细胞内自噬流的改变；通过CCK8实验检测细胞增殖能力的改变，通过Matrigel实验检测CCEC的成管能力。通过腹腔注射链脲佐菌素及阿扑吗啡实验筛选出DED大鼠，将其随机平均分为2组（n=5只/组）:DED组和Exo组，另取5只同龄正常雄性大鼠作为正常组，其中正常组和DED组予阴茎海绵窦注射100μl PBS,Exo组予阴茎海绵体注射USC-Exo 100μl（浓度为1μg/μl）。治疗4周后测定大鼠最大海绵体内压（ICPmax）和平均动脉压（MAP）,通过免疫荧光和Western印迹检测海绵窦内皮细胞标志物CD31,通过Western印迹检测自噬标志物Beclin1和LC3-I/II的蛋白表达，通过透射电镜检测海绵窦内皮细胞内自噬体的数量。结果:自噬流检测结果表明USC-Exo可以显著增加高糖培养CCEC内自噬体的数量（39.5±6.2 vs 12.5±5.4,P＜0.05）。Western印迹结果显示Exo组CCEC的Beclin1蛋白表达水平显著高于高糖组（P＜0.05）。CCK8结果显示Exo组CCEC的增殖能力较高糖组显著升高（P＜0.05）,而自噬抑制剂3-MA可以逆转USC-Exo对CCEC增殖能力的提升作用。Matrigel成管实验表明Exo组CCEC的成管能力较高糖组的显著提高（15.3±3.2 vs 6.3±2.1,P＜0.05）,同样加入3-MA后同样可以逆转这一作用。海绵体测压结果显示Exo组大鼠的ICPmax和ICPmax/MAP水平均较DED组显著升高[（86.6±12.6） mmHg vs（37.9±10.9） mmHg, 89.3±14.1 vs 41.7±11.5,P＜0.05]。Western印迹结果显示Exo组大鼠的海绵体内CD31、Beclin1和LC3-I/II的蛋白含量显著高于DED组大鼠（P＜0.05）。透射电镜结果表明，Exo组大鼠阴茎海绵窦内皮细胞的自噬体数量显著多于DED组（3.7±0.6 vs 1.0±1.0,P＜0.05）。结论:USC-Exo可以通过提高大鼠海绵窦内皮细胞的自噬水平，显著改善DED大鼠的海绵窦内皮功能和勃起功能。
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