猪圆环病毒2型ORF3基因的克隆及原核表达

来源 :湖南农业科学 | 被引量 : 0次 | 上传用户：hunanlyq

【摘要】

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以细胞总基因组提取试剂盒抽提PCV2细胞毒株总DNA为模板，用特异性引物扩增PCV2ORF3基因。将ORF3和表达载体pGEX-6p-1用BamltI和SalI双酶切回收后连接，将测序验证为阳性的重组质

【作者】

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杨晓燕刘航杨顺利尹双辉尚佑军田永强

【机构】

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兰州交通大学化学与生物工程学院,中国农业科学院兰州兽医研究所

【出处】

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湖南农业科学

【发表日期】

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2012年2期

【关键词】

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猪圆环2型 ORF3 原核表达 porcine circovirus type 2 ORF3 procaryotic expression

【基金项目】

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国家自然科学基金青年基金项目（31101803）

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以细胞总基因组提取试剂盒抽提PCV2细胞毒株总DNA为模板，用特异性引物扩增PCV2ORF3基因。将ORF3和表达载体pGEX-6p-1用BamltI和SalI双酶切回收后连接，将测序验证为阳性的重组质粒命名为pGEX-6p-1-ORF3。重组质粒pGEX-6p-1-ORF3转化BL21（DE3）后用IPTG诱导表达并纯化，对获得的表达产物进行SDS-PAGE电泳、Westernblot检测。结果表明：PCV2ORF3在pGEX-6p-1中获得了高效表达，其表达蛋白主要以包涵体形式存在，其分子质量约为37

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