【摘 要】
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目的 建立沉默Orail稳定大鼠嗜铬细胞瘤细胞(PC12)系,探讨桑白皮对Orai1蛋白介导的神经细胞分化的作用.方法 利用慢病毒感染建立PC12细胞的沉默Orai1稳定细胞系,将细胞分为对照组(shcontrol)、对照+桑白皮组(shcon-trol+ CMR)、沉默Orail组(shOrail)、沉默Orail+桑白皮组(shOrail+ CMR)四组,观察PC12细胞突起生长分化情况;用免疫沉淀法检测细胞内活性Rap1-GTP水平,免疫印迹法检测细胞内ERK磷酸化水平,钙影像检测胞内钙离子相对浓度
【机 构】
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湖北中医药大学针灸骨伤学院,湖北武汉460065;湖北中医药大学基础医学院,湖北武汉430065
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目的 建立沉默Orail稳定大鼠嗜铬细胞瘤细胞(PC12)系,探讨桑白皮对Orai1蛋白介导的神经细胞分化的作用.方法 利用慢病毒感染建立PC12细胞的沉默Orai1稳定细胞系,将细胞分为对照组(shcontrol)、对照+桑白皮组(shcon-trol+ CMR)、沉默Orail组(shOrail)、沉默Orail+桑白皮组(shOrail+ CMR)四组,观察PC12细胞突起生长分化情况;用免疫沉淀法检测细胞内活性Rap1-GTP水平,免疫印迹法检测细胞内ERK磷酸化水平,钙影像检测胞内钙离子相对浓度.结果 与对照组比较,对照+桑白皮组细胞明显分化,活性Rap1-GTP水平和ERK磷酸化水平升高,胞内钙离子浓度升高;与对照+桑白皮组细胞比较,沉默Orail+桑白皮组未见细胞分化,活性Rap1-GTP水平和ERK磷酸化水平降低,胞内钙离子浓度降低.结论 沉默Orail可抑制PC12细胞分化并减弱桑白皮对神经分化的促进作用,其机制可能是通过抑制细胞钙内流,阻断分化信号途径Rap1-ERK活化实现的.
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