从酵母人工染色体的人基因组片段直接分离表达顺序的初步研究

来源 :复旦学报(自然科学版) | 被引量 : 0次 | 上传用户:abkkk123
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报导“从酵母人工染色体的人基因组片段直接筛选表达顺序”的方法体系。以定位于人基因组13q14.3的YAC27D08和人脑。DNA分子库为主要研究材料,从1×106个cDNA克隆中筛选到52个阳性克隆。经PCR扩增产物Southern印迹杂交分析,排除了31个假阳性克隆。继而分别用人基因组总DNA、酵母基因组DNA和人的rDNA为探针作dotblot杂交分析,又排除18个非特异杂交的克隆,最后得到3个候选cDNA克隆。经与YAC27D08以及10个定位于染色体其他区带的YAC克隆作杂交验证,确认这3个cDNA克隆是来自YAC27D08的特异性表达顺序。它们被分别命名为cfd13—1,cfd13—2,cfd13—3。其插入片段分别为2.0kb,1.1kb和3.8kb。Northernblot分析结果表明:cfd13—1和cfd13—2所在基因的转录物分别长9.0kb,7.0kb,cfd13—3则出现6条杂交带,分别长12.0kb,3.0kb,2.2kb,1.5kb,1.0kb和0.6kb。
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