牛支原体（Mycoplasma bovis, Mb）是引起肉牛（Bos taurus）和奶牛疾病的重要病原之一,给养牛业造成了重大的经济损失。烯醇化酶（enolase, eno）为糖酵解途径的关键限速酶,主要催化2-磷酸甘油酸转化为磷酸烯醇式丙酮酸。为研究Mb eno酶促活性及其动力学参数,本研究参照GenBank中Mb PG45株eno基因（NC₀14760.1）序列设计特异性引物,应用PCR扩增获得Mb武威分离株的eno基因。在序列分析及基因优化的基础上,构建其原核表达载体p ET-eno并转化大肠杆菌（Escherichia coli）表达菌Transetta（DE3）,经异丙基硫代半乳糖苷（isopropylβ-D-1-thiogalactopyranoside, IPTG）诱导表达,在十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳（sodium dodecyl dulfate polyacrylamide gel electropheresis, SDS-PAGE）分析的基础上,纯化表达产物对其酶促活性进行分析。结果表明,优化后的Mb武威株eno基因在大肠杆菌中成功获得表达,重组蛋白His-eno大小约为53 kD,且主要以可溶性蛋白形式存在;酶活分析结果显示:纯化产物His-eno的催化活性略高于兔肌肉烯醇化酶,且其最适温度为42℃,最适pH为8.0。双倒数作图所得Hiseno米氏常数（K_m）和最大反应速率(V_max)分别为4.1×10^-3mol/L和3.4μmol/（L·min）。本研究结果为进一步研究Mb eno的生物学功能提供基础资料。