一种新的干扰素基因刺激因子剪接异构体STING(sv)的结构和功能

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干扰素基因刺激因子(Stimulator of interferon genes,STING)是病毒感染后机体抗病毒固有免疫反应过程中的重要蛋白分子。为了寻找STING新的剪接异构体,我们抽提了人类胚胎肾(Human embryonic kidney,HEK)293细胞RNA,用全长STING的mRNA(NM-198282.82)序列设计引物,作cDNA末端快速放大(RACE)及RTPCR,生物信息学方法比较新序列,亚克隆STING野生型(wt)及STING剪接异构体(sv)至真核表达载体pEGFPC1和pcDNA 3.1中。质粒EGFP-STING(wt)和EGFP-STING(sv)转染HEK 293细胞,用抗EGFP抗体作Western blot分析;质粒pcDNA-STING(wt)和pcDNA-STING(sv)转染HEK 293细胞,作荧光素酶功能分析以检测新剪接异构体对病毒诱导的干扰素β启动子荧光素酶活性的影响。我们发现了STING 3′端新的剪接异构体,与野生型相比,它缺失了第7外显子,导致阅读框架移位,相应蛋白质的C端30个氨基酸不同于野生型。Western blot出现相对分子质量(Mr)为58×10~3的STING(sv)蛋白强阳性条带。STING(sv)荧光素酶功能分析显示,该剪接异构体能明显抑制病毒诱导的干扰素β启动子活性。STING(sv)在多数组织和不同细胞系中都能表达。STING(sv)的发现为STING这一重要分子的功能调节提供了新的线索,它可能是病毒感染通路中干扰素的显性负性抑制剂,提示其为干扰素产生的精细调节成分,在人类病毒感染性疾病中的病理意义值得探究。
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