【摘 要】
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以沙田柚上胚轴为对象,进行了农杆菌介导的抗菌肽shivaA基因转入沙田柚影响因素研究。研究结果表明转化中抑菌抗菌素以羧苄青霉素为首选,最佳转化条件为菌液稀释至OD6000.5,
【机 构】
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广西农业科学院植物保护研究所,广西农业科学院植物保护研究所,广西林业科学院,广西农业科学院植物保护研究所 广西南宁530007,广西南宁530007,广西南宁530001,广西南宁530007
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以沙田柚上胚轴为对象,进行了农杆菌介导的抗菌肽shivaA基因转入沙田柚影响因素研究。研究结果表明转化中抑菌抗菌素以羧苄青霉素为首选,最佳转化条件为菌液稀释至OD6000.5,浸泡时间10min,共培养3d,卡那霉素起始选择浓度50μg/mL。农杆菌再悬浮液与共培养基中加入150μmol/L阿魏酸可提高转化频率。PCR与Southern杂交证明,外源基因已转入沙田柚基因组中。
In order to study the effect of Agrobacterium tumefaciens mediated shivaA gene transfer into Shatian pomelo on the hypocotyl of Shatian pomelo, The results showed that the antibacterials of bacteriostasis were the first choice of carbenicillin. The optimum conditions of transformation were diluted to OD6000.5, soaking time 10min, co-culture for 3d, and initial concentration of kanamycin 50μg / mL. Agrobacterium re-suspension and co-culture medium with 150μmol / L ferulic acid can increase the frequency of transformation. PCR and Southern hybridization proved that the foreign gene has been transferred into the genome of Shatianyou.
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