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摘要：目的：建立以HPLC法检测乙肝解毒胶囊中盐酸小檗碱的含量测定。方法： 色谱柱为迪马C18柱;流动相为乙腈-0.05 mol·L-1磷酸二氢钾溶液（24：76）;流速为0.8mL/min;柱温：25℃;检测波长：265nm。结果：盐酸小檗碱浓度在0.0240～0.2160?g/mL范围内与其峰面积线性关系良好，r=1.0000;平均回收率为100.33%，RSD=0.57%（n=6）。结论：本法快速、简便、准确，可用于乙肝解毒胶囊质量控制的方法。
关键词：乙肝解毒胶囊;盐酸小檗碱;高效液相色谱法
【中图分类号】R821.4+2 【文献标识码】A 【文章编号】1004-7484（2019）10-0072-02
Determination of Berberine in Yiganjiedu Capsules by HPLC
Zhang jin，Li wenjun
Tonghua Institute for Food and Drug Control，Jilin Province，Tonghua 134000
ABSTRACT：Objective To establish an HPLC method for determination of berberine in Yiganjiedu Capsules.Methods HPLC analysis was carried out on a Diamonsil C18 column;Using acetonitrile-0.05mol·L-1 potassium dihydrogen phosphate solution（24：76）; the flow rate was 0.8 mL·min-1;the column temperature was set at 25℃;the detection wavelength was 265nm. Results A good linear correlation of berberine was observed within the range of 0.0240～0.2160?g·mL-1，r=1.0000;The average recovery was 100.33%，RSD =0.57%（n=6）.Conclusion The method is rapid，simple and accurate，which can be used for the quality control of Yiganjiedu Capsules.
KEY WORDS： Yiganjiedu Capsules;berberine;HPLC
乙肝解毒膠囊是由黄柏、拳参、黄芩等八味药材组成，具有清热解毒，疏肝利胆的功效，用于治疗乙型肝炎[1-8]。黄柏为方中主药，主要含有盐酸小檗碱、巴马亭（palmatine）、药根碱（jatrorrhizine）、黄柏碱（phellodendrine）等。具有清热燥湿，泻火除蒸，解毒疗疮与本品的功能主治有密切关系[9-12]。为了有效地控制乙肝解毒胶囊的内在质量，我们以黄柏中的盐酸小檗碱作为指标性成分，采用高效液相色谱法测定盐酸小檗碱的含量，方法易于操作，结果准确，重现性好，专属性强[13-16]。
1 仪器与试药
日本岛津LC-2010AHT高效液相色谱仪;赛多利斯电子分析天平;日本岛津UV1700型紫外分光光度计。
盐酸小檗碱对照品（中国食品药品检定研究院，批号： 110713-201814）;乙肝解毒胶囊（市售，批号：20180920.20181102。181101）乙腈为色谱纯，水为纯化水，其它试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件：色谱柱为迪马C18（4.6×250mm，5?m）;流动相为乙腈-0.05 mol/L磷酸二氢钾溶液（24：76）;流速为0.8mL/min;柱温为25℃;检测波长为265nm;进样量为10?l，理论板数按盐酸小檗碱峰计算应不低于4000。
2.2 对照品溶液的制备：精密称取盐酸小檗碱对照品适量，加1%盐酸甲醇溶液制成每1ml含10?g的溶液，即得。
2.3 供试品溶液的制备：取本品装量差异项下的内容物，混匀，研细，取约1g，精密称定，置锥形瓶中，加入1%盐酸甲醇溶液80ml，超声处理40分钟，滤过，滤液置100ml容量瓶中，用少量1%盐酸甲醇溶液洗涤容器及残渣，洗液滤于同一容量瓶中，加1%盐酸甲醇溶液稀释至刻度，摇匀，即得。
2.4 阴性对照溶液的制备：按处方比例配成不含黄柏的阴性对照样品，照供试品溶液的制备方法，制成阴性对照溶液。按上述液相色谱条件进行测定，结果表明，阴性对照溶液色谱图中与对照品相同保留时间处无干扰见图1。
2.5 线性关系考察：精密称取盐酸小檗碱对照品适量，加1%盐酸甲醇溶液溶解并稀释，制得浓度为12.0?g/ml的对照品溶液，分别精密吸取2、6、10、14、18?l测定（平行两次），以峰面积对盐酸小檗碱浓度回归，得回归方程：Y=4843052.083x-4404.05 （r=1.0000），结果表明盐酸小檗碱在0.0240～0.2160?g/mL范围内与峰面积呈良好的线性关系。 2.6 精密度试验：精密吸取同一供试品溶液10?l，注入液相色谱仪，重复进样6次，结果盐酸小檗碱峰面积平均值为576525，RSD为0.25%（n=6）。
2.7 重复性试验：取同一批样品，按“2.3”项下操作方法独立测定六次，用外标法计算盐酸小檗碱含量，平均值为0.3mg/粒;RSD为0.31%（n=6）。
2.8 稳定性试验：取同一批样品的供试品溶液，分别于0、2、4、8、12h，按上述色谱条件测定，盐酸小檗碱峰面积平均值为576867，RSD为0.17%。结果表明供试品溶液在12 h内稳定。
2.9 回收率试验：精密称取已知含量为0.30mg/粒的样品适量（6份），分别精密加入对照品溶液（0.0131mg/ml）20ml，按“2.3”项下操作，作为试验溶液;按“2.1”项下色谱条件，分别测定，结果见表1
2.10 样品测定：取3批样品，按“2.3” 项下操作，进样10?l，按外标法计算盐酸小檗碱含量，结果见表2。
3 讨论
3.1 检测波长的选择
取盐酸小檗碱对照品的甲醇溶液，经UV-1700紫外分光光度计200～400nm范围内扫描，结果盐酸小檗碱在265.0nm波长处，有最大吸收，故选择265nm作為测试波长。
3.2 提取时间的考察
参照有关资料对提取方法、时间进行考察，先采用取本品加1%盐酸甲醇溶液超声30，40，60min，结果表明超声40min时的含量比30min时高，与60min时含量相近。又采用加热回流的40，60min，结果其含量与超声40min相近。因此采用加1%盐酸甲醇溶液超声40min制备供试品溶液。
3.3 样品提取方法的考察：我们采用了三氯甲烷50ml与浓氨试液1ml，密塞，轻轻振摇，称定重量，放置24小时及精密加入氢氧化钠试液3ml，放置30分钟，再精密加入三氯甲烷20ml，称定重量，加热回流2小时。结果后者提取方法即节省时间又提取充分，因此我们采用正文所述的供试品溶液的制备方法。
参考文献
[1]佘金燕，任平远，马小兵，等.乙肝解毒胶囊的微生物限度检查方法验证[J].中国民族民间医药，2016，25（11）：10-11.
[2]蒋永海，朱辉.乙肝解毒胶囊中非法成分土大黄苷的检测[J].华西药学杂志，2011，26（04）：397.
[3]赵晓波，丁红强，袁锐利，等.HPLC法测定乙肝清热解毒胶囊中大黄素的含量[J].中医学报，2010，25（06）：1136-1138.
[4]宫淑枝，贡庆欣.HPLC法测定乙肝解毒胶囊中黄芩苷的含量[J].中国医药指南，2010，8（26）：50-51.
[5]曾永芳，黄丽涵，徐远金.乙肝解毒胶囊中5种有效成分的胶束电动色谱-质谱联用法测定[J].分析测试学报，2010，29（03）：262-266.
[6]徐菁，葛风芹，黄桂芹，等.乙肝清热解毒胶囊联合拉米夫定治疗活动性肝炎肝硬化102例分析[J].中国误诊学杂志，2009，9（34）：8470-8471.
[7]秦慧清.乙肝清热解毒胶囊治疗乙型肝炎（湿热中阻证）疗效观察[J].中国医学创新，2009（34）：72-73.
[8]徐菁，黄桂芹，耿建洪.乙肝清热解毒胶囊联合拉米夫定治疗活动性肝炎肝硬化临床研究[J].河北中医，2009，31（10）：1508-1510.
[9]陆凤琪，周海嫔，陈文成，等.HPLC同时测定翻黄合剂中芍药苷和盐酸小檗碱含量[J].中国兽药杂志，2019，53（07）：25-29.
[10]朱云.HPLC法同时测定消炎止痛洗剂中大黄酚和盐酸小檗碱的含量[J].中国处方药，2019，17（07）：48-49.
[11]蔡勇科，吴俊贤，黎晓曲.高效液相色谱法测定外科舒筋洗剂中盐酸小檗碱的含量[J].中国现代药物应用，2019，13（13）：233-236.
[12]张苇苇.HPLC法同时测定黄柴安胃胶囊中盐酸小檗碱和黄芩素的含量[J].中国处方药，2019，17（06）：38-39.
[13]岑志芳，吴晓纯，郑昊圳，等.HPLC法测定双黄水凝胶中盐酸小檗碱的含量[J].佛山科学技术学院学报（自然科学版），2018，36（04）：75-78.
[14]黄传俊，梅勇，杨莉，等.HPLC法同时测定金蝉止痒胶囊中盐酸小檗碱、黄芩苷和蛇床子素的含量[J].中国药房，2018，29（12）：1621-1624.
[15]邵文涛，孙海东，王起晗，等.盐酸小檗碱缓解高胆固醇所致肝脏损伤的机制体外及动物实验研究[J].诊断学理论与实践，2018，17（03）：311-317.
[16]黄传俊，杨莉，梅勇，等.HPLC切换波长法同时测定健脾止泻宁颗粒中盐酸小檗碱和黄芩苷的含量[J].中国药房，2018，29（10）：1324-1327.
作者简介：张进，男，副主任药师，研究方向：药品检验。
关键词：乙肝解毒胶囊;盐酸小檗碱;高效液相色谱法
【中图分类号】R821.4+2 【文献标识码】A 【文章编号】1004-7484（2019）10-0072-02
Determination of Berberine in Yiganjiedu Capsules by HPLC
Zhang jin，Li wenjun
Tonghua Institute for Food and Drug Control，Jilin Province，Tonghua 134000
ABSTRACT：Objective To establish an HPLC method for determination of berberine in Yiganjiedu Capsules.Methods HPLC analysis was carried out on a Diamonsil C18 column;Using acetonitrile-0.05mol·L-1 potassium dihydrogen phosphate solution（24：76）; the flow rate was 0.8 mL·min-1;the column temperature was set at 25℃;the detection wavelength was 265nm. Results A good linear correlation of berberine was observed within the range of 0.0240～0.2160?g·mL-1，r=1.0000;The average recovery was 100.33%，RSD =0.57%（n=6）.Conclusion The method is rapid，simple and accurate，which can be used for the quality control of Yiganjiedu Capsules.
KEY WORDS： Yiganjiedu Capsules;berberine;HPLC
乙肝解毒膠囊是由黄柏、拳参、黄芩等八味药材组成，具有清热解毒，疏肝利胆的功效，用于治疗乙型肝炎[1-8]。黄柏为方中主药，主要含有盐酸小檗碱、巴马亭（palmatine）、药根碱（jatrorrhizine）、黄柏碱（phellodendrine）等。具有清热燥湿，泻火除蒸，解毒疗疮与本品的功能主治有密切关系[9-12]。为了有效地控制乙肝解毒胶囊的内在质量，我们以黄柏中的盐酸小檗碱作为指标性成分，采用高效液相色谱法测定盐酸小檗碱的含量，方法易于操作，结果准确，重现性好，专属性强[13-16]。
1 仪器与试药
日本岛津LC-2010AHT高效液相色谱仪;赛多利斯电子分析天平;日本岛津UV1700型紫外分光光度计。
盐酸小檗碱对照品（中国食品药品检定研究院，批号： 110713-201814）;乙肝解毒胶囊（市售，批号：20180920.20181102。181101）乙腈为色谱纯，水为纯化水，其它试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件：色谱柱为迪马C18（4.6×250mm，5?m）;流动相为乙腈-0.05 mol/L磷酸二氢钾溶液（24：76）;流速为0.8mL/min;柱温为25℃;检测波长为265nm;进样量为10?l，理论板数按盐酸小檗碱峰计算应不低于4000。
2.2 对照品溶液的制备：精密称取盐酸小檗碱对照品适量，加1%盐酸甲醇溶液制成每1ml含10?g的溶液，即得。
2.3 供试品溶液的制备：取本品装量差异项下的内容物，混匀，研细，取约1g，精密称定，置锥形瓶中，加入1%盐酸甲醇溶液80ml，超声处理40分钟，滤过，滤液置100ml容量瓶中，用少量1%盐酸甲醇溶液洗涤容器及残渣，洗液滤于同一容量瓶中，加1%盐酸甲醇溶液稀释至刻度，摇匀，即得。
2.4 阴性对照溶液的制备：按处方比例配成不含黄柏的阴性对照样品，照供试品溶液的制备方法，制成阴性对照溶液。按上述液相色谱条件进行测定，结果表明，阴性对照溶液色谱图中与对照品相同保留时间处无干扰见图1。
2.5 线性关系考察：精密称取盐酸小檗碱对照品适量，加1%盐酸甲醇溶液溶解并稀释，制得浓度为12.0?g/ml的对照品溶液，分别精密吸取2、6、10、14、18?l测定（平行两次），以峰面积对盐酸小檗碱浓度回归，得回归方程：Y=4843052.083x-4404.05 （r=1.0000），结果表明盐酸小檗碱在0.0240～0.2160?g/mL范围内与峰面积呈良好的线性关系。 2.6 精密度试验：精密吸取同一供试品溶液10?l，注入液相色谱仪，重复进样6次，结果盐酸小檗碱峰面积平均值为576525，RSD为0.25%（n=6）。
2.7 重复性试验：取同一批样品，按“2.3”项下操作方法独立测定六次，用外标法计算盐酸小檗碱含量，平均值为0.3mg/粒;RSD为0.31%（n=6）。
2.8 稳定性试验：取同一批样品的供试品溶液，分别于0、2、4、8、12h，按上述色谱条件测定，盐酸小檗碱峰面积平均值为576867，RSD为0.17%。结果表明供试品溶液在12 h内稳定。
2.9 回收率试验：精密称取已知含量为0.30mg/粒的样品适量（6份），分别精密加入对照品溶液（0.0131mg/ml）20ml，按“2.3”项下操作，作为试验溶液;按“2.1”项下色谱条件，分别测定，结果见表1
2.10 样品测定：取3批样品，按“2.3” 项下操作，进样10?l，按外标法计算盐酸小檗碱含量，结果见表2。
3 讨论
3.1 检测波长的选择
取盐酸小檗碱对照品的甲醇溶液，经UV-1700紫外分光光度计200～400nm范围内扫描，结果盐酸小檗碱在265.0nm波长处，有最大吸收，故选择265nm作為测试波长。
3.2 提取时间的考察
参照有关资料对提取方法、时间进行考察，先采用取本品加1%盐酸甲醇溶液超声30，40，60min，结果表明超声40min时的含量比30min时高，与60min时含量相近。又采用加热回流的40，60min，结果其含量与超声40min相近。因此采用加1%盐酸甲醇溶液超声40min制备供试品溶液。
3.3 样品提取方法的考察：我们采用了三氯甲烷50ml与浓氨试液1ml，密塞，轻轻振摇，称定重量，放置24小时及精密加入氢氧化钠试液3ml，放置30分钟，再精密加入三氯甲烷20ml，称定重量，加热回流2小时。结果后者提取方法即节省时间又提取充分，因此我们采用正文所述的供试品溶液的制备方法。
参考文献
[1]佘金燕，任平远，马小兵，等.乙肝解毒胶囊的微生物限度检查方法验证[J].中国民族民间医药，2016，25（11）：10-11.
[2]蒋永海，朱辉.乙肝解毒胶囊中非法成分土大黄苷的检测[J].华西药学杂志，2011，26（04）：397.
[3]赵晓波，丁红强，袁锐利，等.HPLC法测定乙肝清热解毒胶囊中大黄素的含量[J].中医学报，2010，25（06）：1136-1138.
[4]宫淑枝，贡庆欣.HPLC法测定乙肝解毒胶囊中黄芩苷的含量[J].中国医药指南，2010，8（26）：50-51.
[5]曾永芳，黄丽涵，徐远金.乙肝解毒胶囊中5种有效成分的胶束电动色谱-质谱联用法测定[J].分析测试学报，2010，29（03）：262-266.
[6]徐菁，葛风芹，黄桂芹，等.乙肝清热解毒胶囊联合拉米夫定治疗活动性肝炎肝硬化102例分析[J].中国误诊学杂志，2009，9（34）：8470-8471.
[7]秦慧清.乙肝清热解毒胶囊治疗乙型肝炎（湿热中阻证）疗效观察[J].中国医学创新，2009（34）：72-73.
[8]徐菁，黄桂芹，耿建洪.乙肝清热解毒胶囊联合拉米夫定治疗活动性肝炎肝硬化临床研究[J].河北中医，2009，31（10）：1508-1510.
[9]陆凤琪，周海嫔，陈文成，等.HPLC同时测定翻黄合剂中芍药苷和盐酸小檗碱含量[J].中国兽药杂志，2019，53（07）：25-29.
[10]朱云.HPLC法同时测定消炎止痛洗剂中大黄酚和盐酸小檗碱的含量[J].中国处方药，2019，17（07）：48-49.
[11]蔡勇科，吴俊贤，黎晓曲.高效液相色谱法测定外科舒筋洗剂中盐酸小檗碱的含量[J].中国现代药物应用，2019，13（13）：233-236.
[12]张苇苇.HPLC法同时测定黄柴安胃胶囊中盐酸小檗碱和黄芩素的含量[J].中国处方药，2019，17（06）：38-39.
[13]岑志芳，吴晓纯，郑昊圳，等.HPLC法测定双黄水凝胶中盐酸小檗碱的含量[J].佛山科学技术学院学报（自然科学版），2018，36（04）：75-78.
[14]黄传俊，梅勇，杨莉，等.HPLC法同时测定金蝉止痒胶囊中盐酸小檗碱、黄芩苷和蛇床子素的含量[J].中国药房，2018，29（12）：1621-1624.
[15]邵文涛，孙海东，王起晗，等.盐酸小檗碱缓解高胆固醇所致肝脏损伤的机制体外及动物实验研究[J].诊断学理论与实践，2018，17（03）：311-317.
[16]黄传俊，杨莉，梅勇，等.HPLC切换波长法同时测定健脾止泻宁颗粒中盐酸小檗碱和黄芩苷的含量[J].中国药房，2018，29（10）：1324-1327.
作者简介：张进，男，副主任药师，研究方向：药品检验。