【摘 要】
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猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是危害养猪业发展的重要传染病之一,2006年首次在我国爆发的高致病性PRRS(HP-PRRS)其发病率和死亡率与经典的PRRS比较都显著升高。目前,对HP-PRRSV
【机 构】
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中国农业科学院上海兽医研究所; 江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心扬州大学;
【基金项目】
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国家重点研发计划政府间科技创新重点专项(2016YFE0112500);973计划项目(2014CB542701);国家科技支撑计划项目(2015BAD12B01);国家自然科学基金(31670158)
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猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是危害养猪业发展的重要传染病之一,2006年首次在我国爆发的高致病性PRRS(HP-PRRS)其发病率和死亡率与经典的PRRS比较都显著升高。目前,对HP-PRRSV引起的高发病率和高死亡率的机制仍不清楚。本研究利用EGFP标记的HP-PRRSV毒株Hu N4及其体外传代致弱毒株Hu N4-F112,通过shotgun质谱技术对感染PRRSV强弱毒的肺泡巨噬细胞(PAM)进行差异膜蛋白分析。以1MOI的rHuN4-EGFP和rHuN4-F112-EGFP分别感染PAM细胞,24小时后通过流式细胞术,从FITC通道收集被PRRSV感染的PAM,提取膜蛋白进行shotgun质谱分析,最终获得82个在强弱毒感染的PAM间存在差异表达的膜蛋白。感染rHuN4-EGFP的样品与未感染样品相比,有72个蛋白特异表达;感染rHuN4-F112-EGFP的样品与未感染样品相比,有12个蛋白特异表达。通过GO分析发现,这些蛋白主要参与代谢、生物调节、细胞加工过程,大多数蛋白具有结合、催化活性。进一步在MARC-145细胞上过表达部分差异膜蛋白,发现PCSK9能明显抑制PRRSV强毒和弱毒株的复制,Clusterin、ApoliproteinC-II能促进PRRSV强毒株复制。本研究表明Shotgun质谱技术鉴定出的差异表达膜蛋白对PRRSV复制有影响,深入分析PRRSV感染后的差异表达膜蛋白变化将有利于进一步明确PRRSV的致病机制。
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