【摘 要】
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目的:利用筛选出的一株能产D-阿拉伯糖异构酶(D-AI)的耐热菌株,将D-半乳糖转化为D-塔格糖。方法:从实验室保藏的菌株中筛选出一个产D-阿拉伯糖异构酶能力较强的苍白芽孢杆菌,
【机 构】
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江南大学生物工程学院工业生物技术教育部重点实验室粮食发酵工艺与技术国家工程实验室
【基金项目】
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国家“863”计划项目(2011AA100905)
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目的:利用筛选出的一株能产D-阿拉伯糖异构酶(D-AI)的耐热菌株,将D-半乳糖转化为D-塔格糖。方法:从实验室保藏的菌株中筛选出一个产D-阿拉伯糖异构酶能力较强的苍白芽孢杆菌,将该菌株中的D-阿拉伯糖异构酶基因D-AI克隆到载体pET-28a上,并转化到大肠杆菌BL21(DE3)中表达。通过SDS-PAGE分析发现,重组菌株能表达出大量可溶性蛋白。结果:D-阿拉伯糖异构酶纯化酶的最适反应pH值和温度分别是7.0和60℃,在pH6.0～8.0范围和30～70℃范围内具有较好的稳定性。加入Mn2+、Zn2+、Fe2+、Ca2+和Ba2+均能够使D-塔格糖的转化率提高,而Mg2+和Cu2+则对酶活力产生不同程度的抑制。结果表明:底物质量浓度为18g/L的D-半乳糖(含5mmol/L Mn2+),加入到pH值为7.0的重组细胞粗酶液中,在60℃条件下反应12h,可达到最高转化率为41.6%。结论:这表明具有生物活性的重组D-AI在大肠杆菌E.coli(BL21)中成功表达且具备工业化生产D-塔格糖的潜能。
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