【摘 要】
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目的:探讨利用干扰RNA(RNAi)抑制血管内皮生长因子(VEGF)基因表达对乳腺癌细胞MCF-7增殖和凋亡的影响.方法:设计针对VEGF基因的小干扰RNA (siRNA), 合成DNA模板, 体外转录siR
【机 构】
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青岛大学医学院生物化学与分子生物学教研室
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目的:探讨利用干扰RNA(RNAi)抑制血管内皮生长因子(VEGF)基因表达对乳腺癌细胞MCF-7增殖和凋亡的影响.方法:设计针对VEGF基因的小干扰RNA (siRNA), 合成DNA模板, 体外转录siRNA.以脂质体转染法将双链siRNA导入MCF-7细胞后, 用MTT比色法检测siRNA对MCF-7细胞增殖的影响.通过Hoechst33258染色观察MCF-7细胞的凋亡.用流式细胞术检测细胞周期的改变, RT-PCR检测VEGF mRNA表达的变化, 免疫细胞化学法检测VEGF蛋白的表达.结果:所设计的两个靶位点siRNA, 均能有效地抑制MCF-7细胞的增殖, 诱导细胞凋亡, 使细胞周期阻滞于G0/G1期,VEGF mRNA及其蛋白的表达明显减少;而作为阴性对照的错义序列组siRNASCR则没有上述效应.结论:体外转录合成的siRNA可抑制MCF-7细胞中VEGF基因的表达, 抑制细胞增殖,促进细胞凋亡.
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