【摘 要】
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目的 探讨颗粒蛋白前体(progranulin,PGRN)在矽肺小鼠模型中的表达,及其对人肺成纤维细胞(human pulmonary fibroblast,HPF)增殖和分化的影响,并研究其机制.方法 在小鼠体内建立矽肺模型,利用RT-qPCR和免疫组化法检测肺组织中PGRN的mRNA和蛋白表达;在体外,利用CCK-8实验检测PGRN对HPF细胞增殖的影响,利用 RT-qPCR 检测 HPF 细胞 Ⅰ 型胶原 α1 链(collagen type Ⅰ alpha 1 chain,co/lal),Ⅲ 型胶
【机 构】
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四川大学华西公共卫生学院/华西第四医院,四川成都610041;四川大学华西公共卫生学院/华西第四医院,四川成都610041;四川大学华西-协和陈志潜卫生健康研究院职业病防治研究中心,四川成都61004
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目的 探讨颗粒蛋白前体(progranulin,PGRN)在矽肺小鼠模型中的表达,及其对人肺成纤维细胞(human pulmonary fibroblast,HPF)增殖和分化的影响,并研究其机制.方法 在小鼠体内建立矽肺模型,利用RT-qPCR和免疫组化法检测肺组织中PGRN的mRNA和蛋白表达;在体外,利用CCK-8实验检测PGRN对HPF细胞增殖的影响,利用 RT-qPCR 检测 HPF 细胞 Ⅰ 型胶原 α1 链(collagen type Ⅰ alpha 1 chain,co/lal),Ⅲ 型胶原 α1 链(collagen type Ⅲalpha 1 chain,col3a1)、纤维连接蛋白(fibronectin,fn)的mRNA表达;western blot检测HPF细胞增殖相关信号通路ERK1/2-p-ERK1/2、分化相关蛋白纤维连接蛋白(fibronectin,FN)的表达;细胞免疫荧光检测PGRN对HPF细胞FN蛋白表达的影响.结果 在矽肺小鼠模型中,RT-qPCR结果显示在肺组织中PGRN的mRNA水平升高(t=6.646,P＜0.001),蛋白水平升高(t=8.278,P＜0.001).与对照组比较,外源性PGRN作用48 h促进HPF细胞增殖(F=34.835,P＜0.001),1.0 μg/ml PGRN 上调 collal mRNA 表达 1.10倍(i=4.867,P=0.040),col3al mRNA 表达 1.14倍(t=6.733,rnP=0.021)、fn mRNA 表达2.85倍(t=11.684,P=0.007);0.5 pg/ml PGRN 组的 p-ERK1/2蛋白表达上调 1.9倍(q=24.663,P＜0.001),FN 蛋白上调 1.1 倍(q=7.206,P＜0.001);1.0 μg/ml PGRN 组的 p-ERK1/2蛋白表达上调2.7倍(q=47.243,P＜0.001),FN蛋白上调1.5倍(q=32.997,P＜0.001),呈剂量依赖趋势.免疫荧光实验也证实PGRN促进HPF细胞FN蛋白表达升高.结论 PGRN在矽肺中高表达,并促进肺成纤维细胞增殖和分化,提示PGRN可能是参与矽肺纤维化进展的重要细胞因子.
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