【摘 要】
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目的 探讨转录抑制因子ZHX2对人甲胎蛋白(AFP)启动子的抑制作用.方法 PCR扩增人ZHX2基因,构建ZHX2与绿色荧光蛋白和HA-tag融合表达载体pEGFP-ZUX2、pcDNA-ZHX2-HA,共转染后通
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目的 探讨转录抑制因子ZHX2对人甲胎蛋白(AFP)启动子的抑制作用.方法 PCR扩增人ZHX2基因,构建ZHX2与绿色荧光蛋白和HA-tag融合表达载体pEGFP-ZUX2、pcDNA-ZHX2-HA,共转染后通过荧光显微镜及Western blot检测融合基因的表达.扩增人AFP核心启动子269 bp插入pGL3-Basic,构建报告质粒phAF269.将pcDNA-ZHX2-HA和phAF269共转染HepG2细胞,48 h后裂解细胞,双荧光检测分析ZHX2对AFP启动子的抑制作用.结果 荧光显微镜及Western blot检测证实pEGFP-ZHX2和pcDNA-ZHX2-HA可在体外有效表达ZHX2融合蛋白,双荧光实验表明报告质粒phAF269具有AFP启动子活性,且pcDNA-ZHX2-HA与phAF269共转染HepG2后可显著抑制AFP启动子的转录作用,此抑制作用具有剂量依赖性.结论 成功构建两种新型转录抑制因子ZHX2融合表达载体,并证实其对人AFP启动子的抑制作用,为进一步探讨肝癌发生中AFP表达调控机制及提高AFP介导的靶向肿瘤基因治疗提供基础资料.
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