【摘 要】
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目的研究叉头状转录因子O1(FoxO1)对高糖培养下大鼠肾小球系膜细胞增殖的影响及其作用机制。方法构建含组成性激活突变型FoxO1(CA-FoxO1)编码序列的过表达慢病毒载体(LV-CA-FoxO1)及表达针对FoxO1的小干扰RNA序列(siRNA-FoxO1)的慢病毒载体(LV-siRNA-FoxO1)用于上调或下调FoxO1的表达，并构建空慢病毒载体(LV-NC-FoxO1)作为阴性对照。
【机 构】
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450052 郑州大学第一附属医院内分泌科，河南省高等学校临床医学重点学科开放实验室,450052 郑州大学第一附属医院内分泌科，河南省高等学校临床医学重点学科开放实验室,450052 郑州大学第一附
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目的研究叉头状转录因子O1(FoxO1)对高糖培养下大鼠肾小球系膜细胞增殖的影响及其作用机制。
方法构建含组成性激活突变型FoxO1(CA-FoxO1)编码序列的过表达慢病毒载体(LV-CA-FoxO1)及表达针对FoxO1的小干扰RNA序列(siRNA-FoxO1)的慢病毒载体(LV-siRNA-FoxO1)用于上调或下调FoxO1的表达，并构建空慢病毒载体(LV-NC-FoxO1)作为阴性对照。将系膜细胞分为5组处理，正常糖(5.6 mmol/L，NG组)、单纯高糖(30 mmol/L，HG0组)、LV-NC-FoxO1＋高糖(HG1组)、LV-siRNA-FoxO1＋高糖(HG2组)及LV-CA-FoxO1＋高糖(HG3组)。各组细胞培养72 h后，用MTT法分析系膜细胞增殖情况；流式细胞仪检测系膜细胞周期分布；实时荧光定量PCR及蛋白免疫印迹法分别检测FoxO1、细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂p27、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)及周期蛋白依赖性激酶4(CDK4)的表达情况。
结果与NG组相比，HG0组的高糖刺激系膜细胞过度增殖；HG0组与HG1组系膜细胞的增殖速率及FoxO1表达量均无统计学差异；LV-CA-FoxO1上调HG2组中FoxO1的表达(P<0.05)，导致细胞周期阻滞于G1期且抑制细胞增殖速率，并伴随着p27表达的升高，cyclin D1与CDK4表达的降低(均P<0.05)；LV-siRNA-FoxO1下调HG3组中FoxO1的表达(P<0.05)，导致细胞增殖速率加快，并伴随着p27表达的降低，cyclin D1与CDK4表达的升高(均P<0.05)。
结论利用转基因技术靶向性地调节FoxO1的表达，从而通过FoxO1/p27信号通路调节系膜细胞的增殖。这些发现表明FoxO1可能成为治疗早期糖尿病肾病的靶点。
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