【摘 要】
：
旨在构建整合型诱导表达猪生长激素(Porcine growth hormone,pGH)载体,在细胞水平验证其诱导效率及表达效率。从pTRE-GH12载体上扩增TRE-GH片段,通过Sal I酶切位点连接到pCAG
【机 构】
：
扬州大学兽医学院,中国农业科学院北京畜牧兽医研究所/农业部畜禽遗传资源与利用重点开放实验室
【基金项目】
：
国家转基因新品种培育重大专项(2011ZX08006-003);国家自然科学基金资助项目(31272405;31000993);江苏高校优势学科建设工程资助项目
论文部分内容阅读
旨在构建整合型诱导表达猪生长激素(Porcine growth hormone,pGH)载体,在细胞水平验证其诱导效率及表达效率。从pTRE-GH12载体上扩增TRE-GH片段,通过Sal I酶切位点连接到pCAGGS-rtTA载体中,构建重组载体pCAGGS-rtTA-TRE-GH12(下称pTTGH),将pTTGH质粒转染猪PK15细胞,经G418筛选后,在培养液中添加诱导底物强力霉素(Doxycycline,DOX)后不同时间段通过实时荧光定量PCR(QRT-PCR)测定细胞内pGH mRNA的表达;在培养液中添加不同浓度的的DOX,通过QRT-PCR及Western blot测定细胞内pGH的表达变化。酶切及测序结果表明成功构建了pTTGH载体;QRT-PCR结果表明,和对照组相比,试验组细胞培养液中添加诱导底物后外源GH基因表达在36h时最高;在一定浓度范围内,外源GH表达水平和添加DOX的浓度呈现出正相关性,而正常细胞组中GH的表达水平不受DOX添加与否及量的影响。通过条带灰度分析Western杂交结果验证了培养基中一定范围内DOX浓度和pGH表达量呈现出正相关。试验结果表明,本研究成功构建了整合型诱导表达GH载体并能实现GH的可控表达,本研究为以后制备可控表达GH转基因动物、进一步研究GH对机体影响奠定基础。
其他文献
相对于传统人口统计数据,高精度的人口密度空间化分布数据更能反应人口的实际分布情况。由于城市主体位于丘陵地貌上,青岛地区相对其他沿海城市有着特殊的人口分布规律。本文
新课程倡导"一切为了学生发展"的教育理念,目的是关注和促进学生的发展。发展性评价是落实新课程评价精神的有效手段,目前已被广泛地应用于我国中小学教学实践之中。然而在信
新媒体的发展促成新媒体营销手段的形成,在给传统营销模式造成影响的同时,也为企业发展提供新思路、新办法。但是,由于企业的管理者对于新媒体营销认识不到位、国内现有新媒
对施工企业来说,项目的成本是他们的生命线,如果对项目的成本控制得好,就能获得更多的利润,如果管理不好,会使项目成本增加,利润空间就会减小,甚至是亏损。一个施工企业,他们
在实际的小学语文教育中,将小组合作的教学模式纳入到课堂教学中去,有利于提高学生对知识的认识能力,并且满足我国新课改的要求。但是就我国小学语文教学的实际情况来看,在小
通过生化试验、药敏试验、PCR分型、毒力基因的PCR检测及动物试验对分离的猪源链球菌进行药物敏感性、血清型和分子流行病学初步研究。从不同省份猪链球菌病疑似病例猪的心血
对被害人身体各部位的创口进行医学鉴定,从而做出伤情评定,不仅是刑事诉讼中经常出现的情景,更是在法医临床实践中大量出现的情景。早在1990年,最高人民检察院联合公安部、司
经济的高速发展带来城市化进程加快的同时,城市容量不足以及交通拥挤不畅等问题也伴随而生。地下空间的开发利用解决了城市化与土地集约化的双重需求,在城市建设中起着重要作
实验采用常压和高压分别制备出含铁的FexCu1-xBaSrYCu2Oy（x=0～1）系列化合物，本文主要研究x=0.5时样品的结构和超导电性.测量结果显示，高压合成的样品均具有超导电性，对于x=0.5的样
围绕"机器能否思维"的争论和对人工智能(AI)的质疑,本文阐明AI及模拟智能,其特征是对原型(自然智能)的趋同和异化,即两者之间共性与差异同在。这是一种"既-又"(Both/And)思维