【摘 要】
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为了得到结构和功能近似于天然的水貂阿留申病病毒G株(ADV-G)的衣壳蛋白VP2,将ADVG的VP2基因5′端添加His标签后克隆到杆状病毒转移载体(pFastBac1)后转化入大肠杆菌DH10Bac
【机 构】
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中国农业科学院特产研究所; 吉林农业大学研究生院; 白山市畜牧总站;
【基金项目】
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中国农业科学院基本科研业务费预算增量项目(2013ZL037);吉林省畜牧业管理局青年科研基金项目(吉牧科字第201010号)
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为了得到结构和功能近似于天然的水貂阿留申病病毒G株(ADV-G)的衣壳蛋白VP2,将ADVG的VP2基因5′端添加His标签后克隆到杆状病毒转移载体(pFastBac1)后转化入大肠杆菌DH10Bac中重组,筛选重组成功的克隆进行菌液扩增,获得重组的杆粒(Bacmid),然后用重组杆粒转染昆虫细胞(sf9),获得重组的杆状病毒。用P3代病毒感染sf9细胞,接毒后第48小时进行免疫荧光试验,结果,检测到特异的绿色荧光,证实目的蛋白得到成功表达。Western-blot分析结果显示,表达的VP2蛋白能够与His标签单抗和ADV阳性血清产生特异性免疫印迹反应。经过对流免疫电泳(CIEP)验证,在敏感性、特异性、重复性、稳定性方面,表达的VP2蛋白与商业抗原有一致的表现。采用超速离心法对病毒液进行浓缩后,在电子显微镜下可见约为20nm的病毒样颗粒(VLPs)。以上试验结果表明,ADV VP2蛋白在昆虫杆状病毒中得到有效表达,并具有良好的反应原性。
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