促红细胞生成素对高糖诱导人肾小球系膜细胞纤维化的影响及其机制研究

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目的研究促红细胞生成素(EPO)对高糖诱导人肾小球系膜细胞(MCs)增殖及其表达相关细胞因子和炎性因子的影响,探讨EPO对肾脏组织的生物学效应。方法 2014年12月—2015年5月选取人MCs,采用随机数字表法分为:空白对照组、高糖诱导组、甘露醇对照组、EPO对照组、5 U/ml EPO干预组、10 U/ml EPO干预组、20 U/ml EPO干预组、Rho激酶抑制剂组。采用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测Rho A、锌离子相关的Rho A蛋白1(ROCK1)mRNA表达水平;酶联免疫吸附试验法(ELISA)检测结缔组织生长因子(CTGF)、Ⅳ型胶原蛋白、白介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)表达水平;CCK-8法测定细胞增殖吸光度(OD值)。结果高糖诱导组较空白对照组Rho A、ROCK1 mRNA表达水平升高(P<0.05);5 U/ml EPO干预组、10 U/ml EPO干预组、20 U/ml EPO干预组较高糖诱导组Rho A、ROCK1 mRNA表达水平降低(P<0.05);5 U/ml EPO干预组、10 U/ml EPO干预组、20 U/ml EPO干预组Rho A、ROCK1 mRNA表达水平组间两两比较,差异均有统计学意义(P<0.05);Rho激酶抑制剂组较5 U/ml EPO干预组、10 U/ml EPO干预组、20 U/ml EPO干预组Rho A mRNA表达水平升高,ROCK1mRNA表达水平降低(P<0.05)。高糖诱导组、5 U/ml EPO干预组、10 U/ml EPO干预组、20 U/ml EPO干预组Rho A mRNA表达水平与ROCK1 mRNA表达水平均呈正相关(r值分别为0.829、0.898、0.831、0.861,P<0.05)。高糖诱导组较空白对照组培养24 h时CTGF及Ⅳ型胶原蛋白、培养24 h及48 h时IL-6及TNF-α表达水平升高(P<0.05);5 U/ml EPO干预组、10 U/ml EPO干预组、20 U/ml EPO干预组、Rho激酶抑制剂组培养24 h时CTGF及Ⅳ型胶原蛋白,培养24 h及48 h时IL-6及TNF-α表达水平较空白对照组升高,较高糖诱导组降低(P<0.05);10 U/ml EPO干预组、20 U/ml EPO干预组、Rho激酶抑制剂组较5 U/ml EPO干预组培养24 h时CTGF及Ⅳ型胶原蛋白、培养24 h及48 h时IL-6及TNF-α表达水平降低(P<0.05);20 U/ml EPO干预组、Rho激酶抑制剂组较10 U/ml EPO干预组培养24 h时CTGF及Ⅳ型胶原蛋白、培养24 h及48 h时IL-6及TNF-α表达水平降低(P<0.05)。培养24、48、72 h时,高糖诱导组、EPO对照组、5 U/ml EPO干预组、10 U/ml EPO干预组、20 U/ml EPO干预组较空白对照组MCs增殖OD值升高,Rho激酶抑制剂组较空白对照组MCs增殖OD值降低(P<0.05);5 U/ml EPO干预组、10 U/ml EPO干预组、20 U/ml EPO干预组较高糖诱导组MCs增殖OD值升高,Rho激酶抑制剂组较高糖诱导组MCs增殖OD值降低(P<0.05);5 U/ml EPO干预组、10 U/ml EPO干预组、20 U/ml EPO干预组MCs增殖OD值组间两两比较,差异均有统计学意义(P<0.05);3组MCs增殖OD值培养24、48、72 h时两两比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论高糖可抑制人MCs增殖;高糖可促进人MCs的CTGF、Ⅳ型胶原蛋白和IL-6、TNF-α的表达,而EPO在一定浓度和时间范围内可抑制高糖诱导MCs的CTGF、Ⅳ型胶原蛋白和IL-6、TNF-α的表达,促进增殖,保护肾脏,其机制可能与Rho A/ROCK信号转导通路有关。
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