基于CRISPR/Cas9技术的MAVS和NFκB1基因敲除MDCK细胞系的构建及初步鉴定

来源 :中华实验和临床病毒学杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:firefly0808
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目的

构建线粒体抗病毒信号(mitochondrial antiviral signaling, MAVS)和核因子κB1(nuclear factor kappa B1, NFκB1)基因敲除的犬肾细胞系(Madin-Daby canine kidney cells, MDCK),对细胞系的生长特性、流感病毒(influenza virus, Flu)的增殖特性进行初步鉴定。

方法

采用CRISPR/Cas9技术,将MDCK细胞的MAVSNFκB1基因敲除,获得稳定的敲除细胞系。接种Flu并检测培养上清中病毒的血凝(hemagglutinination, HA)滴度和TCID50滴度,与野生MDCK细胞进行比较。

结果

获得2株稳定敲除的MDCK细胞系MDCK-MAVS和MDCK-NFκB1,与野生MDCK细胞同样为贴壁的上皮样细胞。接种Flu后,2株敲除细胞系测定的病毒HA滴度与野生细胞相比无明显差异,TCID50分别比野生MDCK细胞系提高了9.5倍和10倍,其差异有统计学意义(P=0.0316)。

结论

本研究构建的2株基因敲除细胞系MDCK-MAVS和MDCK-NFκB1能够提高Flu的感染力,为Flu的分离培养提供了新的候选细胞系。

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