【摘 要】
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目的构建融合蛋白PTD-Calbindin D28K(CaBP28)的表达质粒,并进行诱导表达、纯化,在体外初步鉴定其跨膜转运功能.方法提取大鼠脑组织总RNA,反转录后用聚合酶链反应(PCR)法扩增
【机 构】
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复旦大学上海医学院神经病学系-华山医院神经科
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目的构建融合蛋白PTD-Calbindin D28K(CaBP28)的表达质粒,并进行诱导表达、纯化,在体外初步鉴定其跨膜转运功能.方法提取大鼠脑组织总RNA,反转录后用聚合酶链反应(PCR)法扩增编码CaBP28的全长cDNA序列,重组入pET-32a及含有PTD的pTransVector表达载体中,测序鉴定后转化大肠埃希菌BL21(DE3),构建重组体的表达菌株.IPTG诱导表达后,以NTA-Ni亲和层析柱进行分离纯化,SDS-PAGE以及Western blot鉴定.纯化的CaBP28及PTD-Ca
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