【摘 要】
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旨在研究WNT4的一个可变剪接体（WNT4-β）对山羊卵泡颗粒细胞增殖的影响。本研究选取4～6月龄健康母羊20只，采集双侧卵巢，体外分离卵泡颗粒细胞进行培养。通过免疫荧光染色技术确定WNT4-β的表达位置；在山羊颗粒细胞中过表达或干扰WNT4-β后，利用RT-qPCR、WesternBlot检测WNT4-β和WNT信号通路中关键标记因子ROA1、RHOA及颗粒细胞增殖标记基因cyclin-D2、C
【机 构】
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河北工程大学生命科学与食品工程学院
【基金项目】
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国家自然科学基金（32102509）； 财政部和农业农村部国家现代农业产业技术体系（CARS-38）； 中国农业科学院科技创新工程（CAAS-ZDRW202106;ASTIP-IAS13）；
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旨在研究WNT4的一个可变剪接体（WNT4-β）对山羊卵泡颗粒细胞增殖的影响。本研究选取4～6月龄健康母羊20只，采集双侧卵巢，体外分离卵泡颗粒细胞进行培养。通过免疫荧光染色技术确定WNT4-β的表达位置；在山羊颗粒细胞中过表达或干扰WNT4-β后，利用RT-qPCR、WesternBlot检测WNT4-β和WNT信号通路中关键标记因子ROA1、RHOA及颗粒细胞增殖标记基因cyclin-D2、CDK4的表达变化；CCK-8技术检测颗粒细胞增殖情况；并通过ELISA分析颗粒细胞中生殖激素水平的变化。免疫荧光染色结果显示，WNT4-β只在山羊卵泡颗粒细胞中表达，在卵母细胞不表达；过表达WNT4-β后，WNT4-β和颗粒细胞增殖因子cyclin-D2、CDK4的mRNA相对表达量极显著增加（P＜0.01），蛋白表达水平显著增加（P＜0.05）；WNT信号通路标记因子ROA1、RHOA mRNA表达水平显著增加（P＜0.05），β-catenin蛋白表达水平显著增加（P＜0.05）；干扰WNT4-β后，WNT4-β、cyclin-D2、CDK4 、ROA1和RHOA 的mRNA表达显著降低（P＜0.05），WNT4-β、cyclin-D2、CDK4 及β-catenin蛋白表达显著降低（P＜0.05）。CCK-8结果显示，过表达WNT4-β促进颗粒细胞增殖（P＜0.05）；ELISA结果显示，过表达WNT4-β后，颗粒细胞中雌二醇(estradiol，E2)水平显著增加（P＜0.05），孕酮(progesterone，P4)水平升高但不显著（P＞0.05）；干扰WNT4-β后则结果相反，颗粒细胞增殖受到抑制（P＜0.05），E2和P4的水平显著降低（P＜0.05）。综上所述，WNT4可变剪接体WNT4-β通过调控WNT信号通路促进山羊卵泡颗粒细胞增殖及类固醇激素分泌，本研究为解析WNT4调控山羊颗粒细胞增殖的潜在分子机制提供理论基础。
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