人肺新型抗蛋白酶性保护因子elafin cDNA的克隆、鉴定及真核表达载体的构建

来源 :中国老年学杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户：maria76

【摘要】

：

目的克隆人肺新型抗蛋白酶性保护因子elafin基因cDNA，构建该基因的真核高效表达载体。方法抽提人肺总RNA进行RT-PCR法扩增，产物由pUCm-T载体装载、DNA测序确定后，用双酶切将Elaf

【作者】

：

杨捷周向东

【机构】

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重庆医科大学附属第二临床医院呼吸内科

【出处】

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中国老年学杂志

【发表日期】

：

2007年7期

【关键词】

：

ELAFIN 真核表达载体克隆 Elafin Eukaryotic expression vector Clone

【基金项目】

：

重庆市应用基础研究项目（200332）

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目的克隆人肺新型抗蛋白酶性保护因子elafin基因cDNA，构建该基因的真核高效表达载体。方法抽提人肺总RNA进行RT-PCR法扩增，产物由pUCm-T载体装载、DNA测序确定后，用双酶切将Elafin cDNA定向克隆到绿色荧光蛋白表达载体pEGFP-N1，转化于大肠杆菌DH5α，筛选阳性克隆，双酶切鉴定重组质粒。结果经RT-PCR获得400b的产物，经DNA测序，确定所扩增片段为人elafin基因cDNA，进而成功筛选出真核表达载体pEGFP-N1-elafin。结论成功构建人elafin基因cDNA

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