探讨α干扰素-1b调控蛋白激酶Cε(protein kinase Cε,PKCε)蛋白激酶Cε、蛋白激酶Cα(protein kinase Cα ,PKCα)抑制肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)纤维化及机制。
方法采用不同浓度α干扰素-1b(100、200、400、800、1 000 U/mL)处理HSC-T6细胞株,同步设置无α干扰素-1b处理的对照组;四甲基偶氮唑盐比色法分析HSC-T6细胞增殖;分析羟脯氨酸含量变化;免疫荧光染色检测PKCε和PKCα的表达,RT-PCR检测PKCε、PKCα、β-链蛋白(β-catenin)、生存素(Survivin)mRNA的水平。蛋白质印迹法检测PKCε、PKCα、β-catenin、Survivin蛋白水平。采用One-Way ANOVA分析。
结果给药24 h后,100、200、400、800、1 000 U/mL α干扰素-1b组抑制率分别为(15.85±1.05)%、(36.59±1.03)%、(45.12±1.05)%、(50.00±1.01)%和(62.20±1.02)%,组间比较差异有统计学意义(F=27.478,P<0.01);48 h抑制率分别为(20.87±1.09)%、(43.96±1.08)%、(53.85±1.08)%、(64.84±1.06)%和(74.72±1.07)%,组间比较差异有统计学意义(F=25.321,P<0.01)。48 h时半抑制浓度为343.47 U/mL。100、200、400 U/mL α干扰素-1b组的羟脯氨酸水平分别为(7.48±0.28)、(6.26±0.17)、(3.86±0.20) μg/mL,均低于对照组的(8.47±0.32) μg/mL,差异均有统计学意义(t值分别为4.033、10.564和21.160,均P<0.05)。100、200、400 U/mL α干扰素-1b组的PKCε荧光强度均低于对照组,比较差异均有统计学意义(t值分别为1.984、2.457、7.771,均P<0.05);PKCα的荧光强度分别也均低于对照组,比较差异均有统计学意义(t值分别为9.232、15.921、22.222,均P<0.01)。随着α干扰素-1b水平的增加,HSC-T6细胞PKCε、PKCα、β-catenin、Survivin mRNA水平较对照组明显下降,比较差异均有统计学意义(t值分别为7.020、24.562、45.701和14.241,均P<0.01)。随着α干扰素-1b水平的增加,HSC-T6细胞PKCε、PKCα、β-catenin和Survivin蛋白水平较对照组明显降低,比较差异均有统计学意义(t值分别为9.564、4.409、10.036和6.794,均P<0.01)。
结论α干扰素-1b能够剂量依赖性地下调肝星状细胞胶原表达,降低PKCε、PKCα、β-catenin、Survivin表达水平,抑制HSC-T6增殖。