【摘 要】
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目的评估新型冠状病毒（2019-nCoV）样本混采对提取、扩增步骤的影响。方法取10只阴性咽拭子储存在6 ml病毒保存液中，充分混匀后1∶2、1∶10稀释，加入灭活2019-nCoV病毒培养液，以模拟10混1、5混1和单人份检测。使用a、b、c 3种提取方式和体系不同的核酸提取试剂及A~E 5种模板上样量和检测灵敏度不同的扩增试剂分别进行提取和扩增。结果对于相同的模拟混采样本，a提取的模板比b、c
【机 构】
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北京医院 国家老年医学中心 国家卫生健康委临床检验中心 中国医学科学院老年医学研究院，北京 100730,北京医院 国家老年医学中心 国家卫生健康委临床检验中心 中国医学科学院老年医学研究院，北京 1
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目的评估新型冠状病毒（2019-nCoV）样本混采对提取、扩增步骤的影响。
方法取10只阴性咽拭子储存在6 ml病毒保存液中，充分混匀后1∶2、1∶10稀释，加入灭活2019-nCoV病毒培养液，以模拟10混1、5混1和单人份检测。使用a、b、c 3种提取方式和体系不同的核酸提取试剂及A~E 5种模板上样量和检测灵敏度不同的扩增试剂分别进行提取和扩增。
结果对于相同的模拟混采样本，a提取的模板比b、c提取的模板检测循环阈值（Ct）分别提前2.10±0.47和3.46±0.62；扩增相同的混采核酸模板，A试剂的N基因Ct值比B试剂提前1.16±0.48，ORF1ab基因Ct提前2.36±0.54。扩增体系中加入10拭子核酸使A试剂检测Ct值滞后1.36±0.32，对B试剂无影响。使用a试剂提取，10混1混采后，C、D、E试剂的扩增Ct值比检测单拭子样本高1.66±0.39。对于400拷贝/ml的10混1样本，C、E试剂均可检出，D试剂的N基因漏检。
结论混采引入的大量人基因组DNA干扰提取和扩增效率。在加大样本提取体积、提高提取试剂性能的同时，应选择大模板量上样、检测灵敏度高的扩增试剂，方可提高系统灵敏度和结果稳定性，大大降低漏检风险。
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