【摘 要】
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以猪源胰蛋白酶作为研究对象,尝试利用删除猪源胰蛋白酶活性位点邻近Ω-loop的方法来提高其热稳定性和活性。首先通过Gromacs v4.5.5分子动力学模拟软件,预测出了胰蛋白酶的
【基金项目】
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国家自然科学基金(31470967);国家科技重大专项(2011ZX09201-301-05,2014ZX09508006-002-002)
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以猪源胰蛋白酶作为研究对象,尝试利用删除猪源胰蛋白酶活性位点邻近Ω-loop的方法来提高其热稳定性和活性。首先通过Gromacs v4.5.5分子动力学模拟软件,预测出了胰蛋白酶的柔性区Fragment 41～46（即Ω-loop所在区域）。然后根据删除Ω-loop结构中不同的氨基酸数目,确立了三个突变R1Q、K3Q及C5Q;通过重叠延伸PCR技术构建突变菌株,发酵表达后,进行了酶热稳定性和活性分析。结果表明,R1Q、K3Q及C5Q的活性在一定程度上均有提高,在热稳定性上R1Q和K3Q有所提高,C5Q有所
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