【摘 要】
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研究活化蛋白C通过靶向VLA-3中性粒细胞亚群来减轻小鼠的严重炎症反应的机制.75只小鼠分为3组:对照组(健康小鼠,n=25)、严重炎症组(脓毒症小鼠,n=25)和活化蛋白C组(脓毒症小
【机 构】
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吉林大学第一医院二部儿科,吉林长春,130031;吉林大学第一医院二部检验科,吉林长春,130031
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研究活化蛋白C通过靶向VLA-3中性粒细胞亚群来减轻小鼠的严重炎症反应的机制.75只小鼠分为3组:对照组(健康小鼠,n=25)、严重炎症组(脓毒症小鼠,n=25)和活化蛋白C组(脓毒症小鼠通过尾静脉注射活化蛋白C,n=25);通过蛋白质免疫印迹检测整联蛋白VLA-3在中性粒细胞中上调表达;通过整联蛋白结合实验,确定与活化蛋白C以高亲和力相互作用整联蛋白;通过流式细胞仪验证活化蛋白C和VLA-3之间对中性粒细胞的相互作用;通过苏木精和曙红染色检测小鼠组织学变化;通过RT-qPCR检测炎症细胞因子(TNF-α、IL-6和IL-10)mRNA表达水平;检测小鼠在手术后静脉注射活化蛋白C后存活率.与对照组(1.32 ±0.21)相比,严重炎症组(4.57±0.56) VLA-3表达量升高(P＜0.05),而VLA-5(1.25 ±0.24)和αVβ3(1.27±0.13)与对照组(1.24±0.33,1.29±0.28)相比无统计学意义(P＞0.05);与VLA-5 (0.66±0.05)和αVβ3 (0.68±0.08)整联蛋白相比,VLA-3(1.76±0.25)对活化蛋白C组表现出高亲和力,且与严重炎症组(0.66±0.12)相比升高(P＜0.05);活化蛋白C组与VLA-3发生特异性结合,VLA-5、αVβ3与活化蛋白C组几乎不发生反应结合.与严重炎症组相比,活化蛋白C组值升高,而阻断剂降低活化蛋白C与VLA-3间的结合(P＜0.05);与对照组相比,严重炎症组充血严重,中性粒细胞聚集和血管内微血栓形成,而活化蛋白C治疗后,减少脓毒症所造成的中性粒细胞增加;严重炎症组TNF-α、IL-6和IL-10 mRNA表达水平较对照组提高,与严重炎症组相比,活化蛋白C组TNF-α、IL-6和IL-10 mRNA表达水降低,有较好的抗炎作用(P＜0.05);活化蛋白C组,小鼠存活率(18只,72.00％)较严重炎症组(7只,28.00％)高(P＜0.05).活化蛋白C通过靶向VLA-3-中性粒细胞亚群,降低炎症细胞因子相关基因的表达,从而减轻小鼠的严重炎症反应.
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