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目的 探讨p16免疫细胞化学、人乳头瘤病毒（HPV）DNA基因分型单独和联合检测在宫颈细胞学不能明确诊断意义的非典型鳞状上皮细胞（ASC-US）分流中的价值。方法 收集2017年3月—2022年1月，585例液基薄层细胞学（TCT）诊断为ASC-US患者的宫颈细胞学标本，使用免疫细胞化学法行p16蛋白检测，生物芯片法行HPV DNA基因分型检测，患者于8周内行阴道镜下病理活检术。以组织学诊断结果为金标准，探讨p16免疫细胞化学和HPV DNA基因分型单独和联合检测方法在同一级别宫颈病变中阳性率的差异，对比同一检测方法在不同级别宫颈病变中阳性率的差异，比较p16免疫细胞化学、HPV DNA基因分型单独和联合检测对高级别鳞状上皮内病变（HSIL）以上病变诊断效能的差异，综合评定一种最优的ASC-US分流方法。结果 （1）（p16+HPV DNA）联合检测在同一级别宫颈病变中阳性率高于p16免疫细胞化学、HPV DNA基因分型检测。（2）p16免疫细胞化学、HPV DNA基因分型、（p16+HPV DNA）联合检测的阳性率均随着宫颈病变程度的加重而递增。（3）（p16+HPV DNA）联合检测的综合诊断效能最佳，其灵敏度、特异度、符合率和约登指数分别为99.07%、62.55%、69.23%、0.62。结论 p16免疫细胞化学检测法与HPV DNA基因分型单独和联合检测均有助于ASC-US分流，但是，（p16+HPV DNA）联合检测具有更优的灵敏度和约登指数，同时保持了较高的特异度和符合率，可有效进行ASC-US分流。