【摘 要】
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目的:探究不同浓度富血小板纤维蛋白(Platelet-rich fibrin,PRF)对小鼠成骨细胞增殖与分化的影响,并观察最优浓度PRF复合β-磷酸三钙对小鼠成骨细胞成骨分化的影响.方法:首先实验分为6组,分别用0％、10％、20％、30％、40％、50％浓度的PRF培养MC3T3-E1成骨细胞,通过CCK-8法检测观察细胞增殖情况,ELISA检测细胞碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase,ALP)活性,划痕实验检测细胞迁移能力,茜素红染色观察细胞钙结节形成情况.随后实验分为2组,对照组无
【机 构】
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资阳市雁江区人民医院口腔科,四川 资阳 641300
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目的:探究不同浓度富血小板纤维蛋白(Platelet-rich fibrin,PRF)对小鼠成骨细胞增殖与分化的影响,并观察最优浓度PRF复合β-磷酸三钙对小鼠成骨细胞成骨分化的影响.方法:首先实验分为6组,分别用0％、10％、20％、30％、40％、50％浓度的PRF培养MC3T3-E1成骨细胞,通过CCK-8法检测观察细胞增殖情况,ELISA检测细胞碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase,ALP)活性,划痕实验检测细胞迁移能力,茜素红染色观察细胞钙结节形成情况.随后实验分为2组,对照组无PRF培养细胞,实验组为最佳浓度PRF培养细胞,两组成骨细胞均复合于β-磷酸三钙,在1 d、3 d和7 d采集细胞,通过ELISA检测骨钙素(OC)和Ⅰ型胶原蛋白(COL-1)的表达,通过WB检测β-catenin、LEF-1、RunX2、Osterix和OPN的蛋白表达.最后,使用β-catenin抑制剂XAV-939处理成骨细胞,通过ELISA检测细胞ALP活性,WB检测β-catenin、LEF-1、RunX2、Osterix和OPN的蛋白表达.结果:10％～50％浓度的PRF均促进了MC3T3-E1成骨细胞的增殖能力和迁移能力,并提高了成骨细胞ALP活性和钙化结节数量,50％PRF是实验中的最佳浓度.此外50％PRF提高复合β-磷酸三钙成骨细胞的OC和COL-1的表达及β-catenin、LEF-1、RunX2、Osterix和OPN的蛋白表达.抑制β-catenin可以降低成骨细胞ALP活性及降低β-catenin、LEF-1、RunX2、Osterix和OPN的蛋白表达.结论:PRF促进成骨细胞增殖分化,浓度越高,效果越明显,50％PRF是本实验中的最佳浓度,其次PRF促进成骨细胞在β-磷酸三钙支架上的骨生成,其与β-catenin通路激活有关.
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