【摘 要】
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采用异硫氰酸胍/酚/氯仿抽提一步法,提取新城疫病毒(NDV)F48E9株及2个东北地区分离株DB3、DB5基因组RNA,并以其为模板经反转录合成 F基因cDNA第1链,再利用PCR技术分段扩增出F
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采用异硫氰酸胍/酚/氯仿抽提一步法,提取新城疫病毒(NDV)F48E9株及2个东北地区分离株DB3、DB5基因组RNA,并以其为模板经反转录合成 F基因cDNA第1链,再利用PCR技术分段扩增出F基因的cDNA.F48E9、DB3和DB5株F基因的cDNA 经酶切修饰后,插入pUC19的多克隆位点中,转化感受态E.coli DH5α.经相对分子质量比较、酶切分析及PCR等鉴定方法筛选出F48E9、DB3和DB5株F基因的阳性克隆.然后采用S an ger′s双脱氧末端终止法对阳性重组子进行核苷酸序列测定,证实分别获得了F48E9、D B3和DB5株F基因的全长cDNA.利用DNASIS及MEGA分析软件,将上述3个毒株的F基因序列与基他11株有代表性的NDV的相应序列进行比较分析,并绘制了14株NDV F基因的系统发育进化树.结果表明,F48E9和DB3株在核苷酸序列上相对独立于Toyoda等所分的A、B、C组,单独成为一组;DB5株与B1 Hitchner株同属B组,说明它们具有较高的同源性.同时也证明我国有不同基因型的毒株在流行.从进化的角度来看,NDV各毒株间确实存在遗传变异,但F蛋白主要功能区遗传相对稳定.
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