【摘 要】
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目的探讨棕榈酸诱导MC3T3–E1成骨细胞的凋亡是否与核因子(NF)–κB的激活有关。方法观察不同浓度(0~1 000 μmol/L)棕榈酸孵育MC3T3–E1成骨细胞24 h后对细胞活力和细胞凋亡的影响。细胞活力用四甲基偶氮唑盐法(MTT法)检测,细胞凋亡用Hochest 33258染核和Western印迹法检测活化型(cleaved) caspase–3蛋白验证。用500 μmol/L棕榈酸分
【机 构】
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510080 广州,中山大学附属第一医院内分泌科(现在安徽医科大学第二附属医院内分泌科),510080 广州,中山大学附属第一医院内分泌科,510080 广州,中山大学附属第一医院内分泌科,51008
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目的探讨棕榈酸诱导MC3T3–E1成骨细胞的凋亡是否与核因子(NF)–κB的激活有关。
方法观察不同浓度(0~1 000 μmol/L)棕榈酸孵育MC3T3–E1成骨细胞24 h后对细胞活力和细胞凋亡的影响。细胞活力用四甲基偶氮唑盐法(MTT法)检测,细胞凋亡用Hochest 33258染核和Western印迹法检测活化型(cleaved) caspase–3蛋白验证。用500 μmol/L棕榈酸分别孵育细胞0~240 min,Western印迹法检测IκBα、p–NF–κB p65蛋白表达。
结果棕榈酸呈时间和浓度依赖的方式抑制MC3T3–E1细胞活性和促进细胞凋亡。500 μmol/L棕榈酸在24 h时细胞活力仅为对照组的54%,cleaved caspase–3蛋白表达则较对照组高3.1倍。棕榈酸诱导p–NF–κB p65在60 min开始升高,120 min时达到高峰增加了2.96倍(P<0.05);IκBα表达水平逐渐下降,以120 min最为明显,下降57%(P<0.05)。10和20 μmol/L浓度的NF–κB抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(PDTC)均能明显抑制棕榈酸诱导的p–NF–κB p65蛋白(1.39±0.12、1.25±0.10比1.76±0.14,均P<0.05);PDTC将cleaved caspase–3和caspase–3蛋白逐渐恢复至接近对照组水平(2.24±0.28比1.29±0.27,0.63±0.01比1.13±0.10,均P<0.05)。
结论棕榈酸诱导的MC3T3–E1成骨细胞凋亡可能通过激活NF–κB转导途径起作用。
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