【摘 要】
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目的 探讨赖氨酸甲基转移酶SET8(lysine methyltransferase SET8)介导损伤调节自噬基因(damage-regulated autophagy modulator 1,DRAM1)调控血管平滑肌细胞(vascular smooth mus-cle cells,VSMCs)凋亡的作用及机制.方法 体外原代培养VSMCs,采用脂质体转染法处理细胞,将细胞分为3组,正常组,SET8-NC组(转染对照NS-shRNA质粒),SET8-shRNA组(转染SET8-shRNA质粒).采用M
【机 构】
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050000石家庄,河北医科大学第四医院肾内科
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目的 探讨赖氨酸甲基转移酶SET8(lysine methyltransferase SET8)介导损伤调节自噬基因(damage-regulated autophagy modulator 1,DRAM1)调控血管平滑肌细胞(vascular smooth mus-cle cells,VSMCs)凋亡的作用及机制.方法 体外原代培养VSMCs,采用脂质体转染法处理细胞,将细胞分为3组,正常组,SET8-NC组(转染对照NS-shRNA质粒),SET8-shRNA组(转染SET8-shRNA质粒).采用MTT比色法检测各组细胞增殖情况;原位末端标记法TUNEL染色检测细胞凋亡情况;Western blot检测各组细胞SET8、DRAM1、B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcelllymphoma2,Bcl-2)、Bc1-2相关x蛋白(Bc1-2 assa-ciated X protein,Bax)的表达情况.为验证DRAM1对VSMCs凋亡的影响,转染DRAM1高表达,将细胞分为3组,正常组,DRAM1-NC组,DRAM1组.检测各组细胞增殖凋亡情况及DRAM1、Bax和Bcl-2的蛋白表达情况.结果 ①与正常组和SET8-NC组比较,MTT结果显示SET8-shRNA组细胞于12h、24h、36h、48h增殖降低(F=267.649,P＜0.001;F=477.534,P＜0.001;F=28.938,P=0.001;F=145.849,P＜0.001),TUNEL染色结果显示SET8-shRNA组绿色荧光颗粒显著增多.Western blot结果显示,与正常组和SET8-NC组比较,SET8-shRNA组SET8、Bc1-2表达降低(F=34.247,P=0.001;F=39.218,P＜0.001),DRAM1、Bax表达升高(F=84.517,P＜0.001;F=15.570,P=0.004).②与正常组和DRAM1-NC组比较,MTT结果显示DRAM1组细胞于12h、24h、36h、48h增殖降低(F=347.170,P＜0.001;F=74.621,P＜0.001;F=56.427,P＜0.001;F=393.547,P＜0.001),TUNEL染色结果显示DRAM1组绿色荧光颗粒显著增多.Western blot结果显示,与正常组和DRAM1-NC组比较,DRAM1组DRAM1和Bax表达升高(F=26.456,P=0.001;F=25.217,P=0.001),Bc1-2表达降低(F=626.70,P＜0.001).结论 SET8低表达可促进血管平滑肌细胞发生凋亡,可能机制是通过上调DRAM1表达,促进凋亡蛋白Bax表达,进而引起血管平滑肌细胞发生凋亡.
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