【摘 要】
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目的 构建Apobec-1互补因子(A1CF)真核表达质粒,转染肺癌细胞A549和H1299并检测其表达.方法 提取肾癌细胞786-o中总RNA,经RT-PCR扩增人A1CF基因,通过酶切法插入pcDNA3.1(+)载体,构建pcDNA3.1(+)-A1CF真核表达质粒,经BamHI和XbaI双酶切及DNA序列测序鉴定.Lipofectamine 2000脂质体转染肺癌细胞,Western blot法检测A1CF在肺癌细胞中的表达情况.划痕和Transwell小室实验观察A1CF对肺癌迁移侵袭能力的影响.
【机 构】
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徐州医科大学第一临床医学院,江苏 徐州 221004;徐州医科大学生理学教研室;徐州医科大学基础医学国家级实验教学示范中心;徐州医科大学临床与实验病理学实验室;徐州市肿瘤医院,江苏 徐州 221000
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目的 构建Apobec-1互补因子(A1CF)真核表达质粒,转染肺癌细胞A549和H1299并检测其表达.方法 提取肾癌细胞786-o中总RNA,经RT-PCR扩增人A1CF基因,通过酶切法插入pcDNA3.1(+)载体,构建pcDNA3.1(+)-A1CF真核表达质粒,经BamHI和XbaI双酶切及DNA序列测序鉴定.Lipofectamine 2000脂质体转染肺癌细胞,Western blot法检测A1CF在肺癌细胞中的表达情况.划痕和Transwell小室实验观察A1CF对肺癌迁移侵袭能力的影响.结果 酶切及测序结果显示pcDNA3.1(+)-A1CF中插入的片段序列测定结果与人A1 CF序列一致,重组质粒转染两种肺癌细胞后,转染组的目的蛋白表达量明显增高,且E-cadherin和P-ERK表达水平也明显增高(P<0.05).结论 成功克隆人A1CF基因cDNA,并构建真核表达质粒.A1CF促进肺癌细胞迁移侵袭可能与ERK的磷酸化有关.
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