观察微小RNA-200c(miR-200c)对膀胱癌细胞T24增殖和细胞周期的影响并探讨其机制。
方法运用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)技术检测膀胱癌5个细胞株中miR-200c的表达水平。借助细胞转染技术，将miR-200c模拟物(mimics)及无义对照序列转染处于对数生长期的膀胱癌T24细胞，分别构建miR-200c过表达(MU组)及阴性对照组(NC组)，并通过Real-time PCR技术进行验证转染效率。用细胞计数试剂盒(CCK-8)检测两组细胞转染24、48及72 h的细胞增殖率，流式细胞术观察细胞周期分布变化，Western blot法检测细胞周期相关蛋白表达水平的变化。
结果(1)miR-200c在膀胱癌细胞株EJ(13.204±0.946)、T24(18.259±0.776)、253J(8.333±0.543)、5637(6.594±0.326)、RT4(11.348±0.513)中表达量均显著高于正常尿路上皮细胞SV-Huc (1.053±0.078)，差异有统计学意义(P＝0.000)。(2)MU组在转染miR-200c mimics 48、72 h后吸光度值(1.485±0.131、2.396±0.110)均显著高于NC组(1.158±0.182、1.893±0.216)，差异有统计学意义(P＝0.050、0.023)。(3)与NC组比较，MU组细胞周期分布G1期比例下降[(54.65±0.60)%比(64.51±0.63)%，P＝0.004]，S期比例上升[(31.43±0.77)%比(27.99±0.53)%，P＝0.034]，G1/S比值下降(1.74±0.06比2.31±0.07，P＝0.013)。(4)转染miR-200c后细胞周期蛋白依赖激酶(CDK)2(1.44±0.10比0.86±0.15，P＝0.005)、CDK4(3.05±0.17比1.24±0.07，P＝0.001)、E2F3(1.81±0.22比1.18±0.20，P＝0.021)表达水平均升高。
结论miR-200c通过调控细胞周期相关蛋白促使膀胱癌T24细胞周期由G1向S期转变，从而促进膀胱癌细胞增殖。