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[目的]构建小鼠肌肉抑制素（MSTN）基因打靶载体。[方法]从小鼠后肢肌肉组织中提取总RNA并合成cDNA,以cDNA为模板克隆MSTN的编码区,以5’UTR及上游共3kb区域和3’UTR及下游共1.4kb区域分别作为长同源臂和短同源臂插入到质粒pBluescript_SK＋中,以neo基因和HSV-tk基因作为正负筛选基因构建MSTN基因的打靶载体pLoxP-5N3T-M。[结果]经酶切和测序鉴定,构建的小鼠MSTN基因打靶载体pLoxP-5N3T-M符合设计要求。[结论]成功构建小鼠MSTN基因打靶载