错配PCR致突变的实验条件研究

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目的 :对目前常用的致突菌株和PCR随机突变方法进行评价.方法:用单链抗体表达质粒转化致突菌株XL1-Red,转种传代7 d,选取克隆测定DNA序列.用错配PCR在相同基因中引入突变,比较不同Mg2+ 浓度、不同dNTP的浓度、不同dITP等条件下所致突变率.结果:在XL1-Red菌株中转种7 d(约50代)后,测定突变率<0.1%.在错配PCR中,增加Mg2+ 浓度可提高突变率,增加dTTP和dCTP浓度的致突变效果优于增加dATP和dGTP的效果.在dITP配以低浓度的dATP 或dGTP时突变
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