【摘 要】
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目的:基于DNA条形码分子鉴定法建立维吾尔药材菠菜子的鉴定方法,并构建菠菜子HPLC指纹图谱和其指标性成分β-蜕皮甾酮的HPLC含量测定方法,为菠菜子的质量控制提供参考.方法:
【机 构】
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新疆维吾尔自治区药品检验研究院,新疆乌鲁木齐830002;湖北省药品监督检验研究院,湖北武汉430012;中南民族大学药学院,湖北武汉430074
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目的:基于DNA条形码分子鉴定法建立维吾尔药材菠菜子的鉴定方法,并构建菠菜子HPLC指纹图谱和其指标性成分β-蜕皮甾酮的HPLC含量测定方法,为菠菜子的质量控制提供参考.方法:以核糖体DNA第二内部转录间隔区(ITS2)为主体条形码序列对菠菜子进行DNA条形码鉴定;采用Agilent ZORBAX SB-Aq C18色谱柱(4.6 mm×250mm,5μm),以甲醇(A)-0.2％磷酸溶液(B)为流动相梯度洗脱(0～ 10 min,10％A;10 ～ 20 min,10％ →30％A;20 ～40 min,30％→40％ A;40 ～65 min,40％→80％A),检测波长240 nm,建立菠菜子的HPLC指纹图谱方法;采用Agilent ZORBAX SB-Aq C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以甲醇(A)-0.2％磷酸溶液(B)为流动相梯度洗脱(0～15 min,45％→40％A;15 ～ 25 min,40％→80％A;25 ～30 min,80％ →45％A;30 ～ 45 min,45％ A),检测波长248 nm,建立指标性成分β-蜕皮甾酮的HPLC含量测定方法.结果:DNA条形码鉴定系统进化树显示,ITS2序列可将菠菜子与其近缘物种很好区分,且分支支持率达100％;HPLC指纹图谱标定7个共有峰,10批菠菜子药材与对照图谱的相似度均大于0.95;指标性成分β-蜕皮甾酮在6.115 ～ 122.304 μg/mL范围内线性关系良好(r=0.9997),重复性试验RSD＜2.0％,加样回收率为97.43％ ～ 103.59％,10批样品中β-蜕皮甾酮的含量为0.099％ ～0.241％.结论:DNA条形码可准确鉴定菠菜子的基原,HPLC指纹图谱专属性强,结合指标性成分β-蜕皮甾酮的含量测定可以控制菠菜子药材的质量.
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