Livin shRNA 表达载体的构建及在胰腺癌细胞的效应研究

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目的:构建Livin shRNA真核表达载体,探讨干扰质粒稳定转染的胰腺癌panc-1细胞系效应。方法合成Livin基因干扰序列并定向插入到RNA干扰(RNAi)真核表达载体pGCsilencerTM U6/Neo/GFP/RNAi质粒,通过测序进行鉴定。干扰质粒经脂质体Lipofectamine 2000介导转染panc-1细胞。经G418持续压力选择和有限稀释法获得稳定转染的细胞系。定量RT- PCR检测所筛选克隆Livin mRNA的转录水平,采用western blot验证Livin蛋白表达水平改
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