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目的
构建有效靶向小鼠高迁移率族蛋白B1(HMGB1)基因的短发卡RNA(shRNA)载体。
方法针对小鼠HMGB1序列设计4条HMGB1干扰序列的shRNA载体:p Yr-1.1-mus HMGB1-sh1~4以及与哺乳动物基因组无同源性序列的shRNA作为对照(NC)组,Xho I酶切鉴定其序列。然后利用质粒转染小鼠肝癌细胞株Hepal-6,实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测干扰效率。
结果经酶切凝胶电泳证实shRNA构建正确;质粒筛选结果表明,转染48 h后,p Yr-1.1-mus HMGB1-sh1~4及NC组的荧光表达率为85%、78%、75%、70%、60%;FQ-PCR显示p Yr-1.1-mus HMGB1-sh1~4组及NC组转染Hepal-6细胞48 h后相对表达量分别为0.52±0.05、0.59±0.08、0.61 ±0.08、0.57±0.21、1.02±0.21。
结论成功构建表达靶向HMGB1的4条sh RNA重组质粒载体,其中p Yr-1.1-mus HMGB1-sh1质粒对HMGB1基因的抑制作用最强,为研究HMGB1的功能提供实验基础。