【摘 要】
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以抗线虫(Alcaligenes faecalis)生防菌BC2000为出发菌株,用带有gfp/luxAB双标记基因的pUTmini-Tn5转座载体,通过电转化法将gfp和luxAB基因整合到BC2000染色体上.转化子的最
【机 构】
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福建农林大学植物病毒研究所,福州,350002福建省农业科学院生物技术中心,福州,350003;福建省农业科学院生物技术中心,福州,350003;福建农林大学植物病毒研究所,福州,350002;
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以抗线虫(Alcaligenes faecalis)生防菌BC2000为出发菌株,用带有gfp/luxAB双标记基因的pUTmini-Tn5转座载体,通过电转化法将gfp和luxAB基因整合到BC2000染色体上.转化子的最终筛选依赖于立体荧光显微镜对菌落的荧光检测,对筛选平板上的菌落进行荧光检测后获得发强烈绿色荧光的标记菌,并命名为BC2001.PCR结果表明,从BC2001的基因组DNA中扩增出约700bp的gfp基因片段.另外标记菌在共聚焦显微镜中观察发现,菌体形态与出发菌YKT相同,均为椭球形或短杆状;标记菌在LB培养过程中荧光素酶活性监测发现,在标记菌的对数生长期,荧光素酶活性快速增加,到了稳定期,由于细胞代谢活性下降导致荧光素酶活性降低,而对照的出发菌株整个生长过程均检测不到荧光素酶活性.这些结果表明,由启动子psbA控制的gfp和luxAB融合基因成功地转化BC2000并在标记菌BC2001中得到高效表达.
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