【摘 要】
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对溶栓药物瑞替普酶在重组毕赤酵母中的表达进行了研究。摇瓶培养时,对pH、甲醇浓度和诱导相起始OD600 nm进行三因子四水平L16(43)的正交实验。结果表明,甲醇浓度的影响最显
【机 构】
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南方医科大学药学院,华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室
【基金项目】
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国家高技术研究发展计划“863计划”(No.2002AA217021,2002AA2Z3451)
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对溶栓药物瑞替普酶在重组毕赤酵母中的表达进行了研究。摇瓶培养时,对pH、甲醇浓度和诱导相起始OD600 nm进行三因子四水平L16(43)的正交实验。结果表明,甲醇浓度的影响最显著。表达量最高的组合为A2B4C4,生长最好的组合为A2B4C2,验证实验显示,A2B4C4的表达量为7.72 mg/L,A2B4C2达到的干重为44.8 g/L。高密度培养结果表明,诱导相最佳甲醇浓度为4‰左右。此时,菌体各阶段的平均比生长速率μ均为最大,表达量也最高,为435.6 mg/L。同时,诱导相pH为6.5时rPA的表达量最高,达到487.0 mg/L。研究发现,pH为4.5和6.5时,39 ku4、1 ku和60 ku的蛋白质间存在反对应关系,初步猜测它们之间可能存在某种修饰关系,需要进一步研究。
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