论文部分内容阅读
背景:分离纯化生物活性肽的方法主要是酶解法,分离产物为多肽混合物,易受微生物侵染,发生变质,分离过程复杂,产量较低;而采用化学合成方法成本又很高.目的:观察以基因工程法高效表达的降血压肽在不同外界条件下的稳定性和活性,及其在体内的降压效果.设计、时间及地点:对比观察实验,2007-11/2008-04在深圳职业技术学院生物技术实验室完成.材料:10周龄雄性原发性高血压模型Wistar大鼠40只,10周龄雄性正常Wistar大鼠10只.原发性高血压模型大鼠收缩压在180mm Hg(1 mm Hg=0.133 kPa)以上纳入实验,正常大鼠收缩压在140 mln Hg以下纳入实验,最终24只原发性高血压模型大鼠和8只正常大鼠纳入实验.降血压肽(序列号为:VLPVPR),为实验室自制:降血压肽标准品(序列号为:VLPVPR),为上海华大天源生物科技有限公司合成.方法:采用反相高效液相色谱法对降血压肽的自身浓度稳定性、热稳定性、耐酸碱性和对血管紧张素转化酶的抑制活性进行观测.原发性高血压模型大鼠24只按灌药剂量不同分组,高剂量(800 μg/kg)、中剂量(400 μg/kg)、低剂量(200 μg/kg)3组,每组8只.实验第1天,3组大鼠均灌水(10 mL/kg)作为空白对照,观察灌水前后的血压变化情况:灌水后大鼠休息1 d,实验第3天,3组大鼠按高、中、低3个剂量灌药(VLPVPR),观察灌药前后的血压变化情况.正常大鼠8只,实验过程同原发性高血压模型大鼠,实验第1天灌水(10 mL/kg)作为空白对照,灌药(VLPVPR)剂量400 μg/kg.主要观察指标:VLPVPR自身的浓度稳定性、耐热稳定性、耐酸碱性.血压测量采用RBP-1型大鼠血压计,分别测定0,1,2,3,4,8,12 h大鼠尾部的动脉血压.结果:在25～100℃,pH≤10.0的情况下,该降血压肽损失率在0.1%～0.9%,其对血管紧张素转化酶的抑制活性基本保持稳定.高、中、低剂量降血压肽的降压幅度均高于空白对照,差异有显著性意义(P0.05).结论:以基因工程法高效表达的降血压肽稳定性好,耐热、耐酸碱能力强,在原发性高血压模型大鼠体内有很明显的降血压效果,但对正常大鼠的血压影响很小.