【摘 要】
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目的 探讨右美托咪定对宫颈癌HeLa细胞凋亡和自噬的影响及磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol-3-kinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)信号通路在其中的作用.方法 取对数生长期人宫颈癌HeLa细胞,分为对照组(不作处理)、右美托咪定低浓度组(1 μmol/L右美托咪定)、右美托咪定中浓度组(10 μmol/L右美托咪定)、右美托咪定高浓度组(100 μmol/L右美托眯定)和通路激活组(100 μmol/L右美托咪定+50 g/L PI3
【机 构】
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湖南省妇幼保健院麻醉科,湖南长沙410000;中南大学湘雅医院麻醉科,湖南长沙410000;湖南省人民医院麻醉科,湖南长沙410000;湖南省结核病防治所麻醉科,湖南长沙410000
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目的 探讨右美托咪定对宫颈癌HeLa细胞凋亡和自噬的影响及磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol-3-kinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)信号通路在其中的作用.方法 取对数生长期人宫颈癌HeLa细胞,分为对照组(不作处理)、右美托咪定低浓度组(1 μmol/L右美托咪定)、右美托咪定中浓度组(10 μmol/L右美托咪定)、右美托咪定高浓度组(100 μmol/L右美托眯定)和通路激活组(100 μmol/L右美托咪定+50 g/L PI3K/Akt通路激活剂740 Y-P).药物处理48 h,5组采用MTT法测定细胞增殖抑制率;采用流式细胞术测定细胞凋亡率;采用单丹磺酰尸胺染色法检测细胞自噬;采用Western blot法检测PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt、B细胞淋巴瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein,Bax)、微管相关蛋白1轻链3(microtubule associated protein 1 light chain 3,LC3)Ⅰ、LC3Ⅱ、Beclin1蛋白相对表达量,计算p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、LC3 Ⅱ/LC3 Ⅰ.结果 右美托咪定低、中、高浓度组及通路激活组细胞增殖抑制率[(27.45±2.16)％、(46.03±3.54)％、(79.64±2.41)％、(33.47±2.02)％]、细胞凋亡率[(15.92±0.96)％、(28.63±1.33)％、(41.25±1.36)％、(17.76±1.17)％]均高于对照组[0、(5.84±0.57)％](P＜0.05);右美托咪定低、中、高浓度组细胞增殖抑制率、细胞凋亡率均依次升高(P＜0.05);通路激活组细胞增殖抑制率、细胞凋亡率均低于右美托咪定中、高浓度组(P＜0.05),均高于右美托咪定低浓度组(P＜0.05).单丹磺酰尸胺染色结果显示,右美托咪定低、中、高浓度组及通路激活组自噬体数量均多于对照组;右美托咪定低、中、高浓度组自噬体数量依次增多;通路激活组自噬体数量少于右美托咪定低、中、高浓度组.右美托咪定低、中、高浓度组及通路激活组p-PI3K/PI3K(0.50±0.05、0.34±0.06、0.22±0.03、0.42±0.04)、p-Akt/Akt (0.69±0.05、0.50±0.06、0.39±0.04、0.59±0.05)及Bcl-2蛋白相对表达量(0.71±0.06、0.53±0.04、0.44±0.04、0.62±0.05)均低于对照组(0.63±0.06、0.87±0.05、0.83±0.06) (P＜0.05),Bax(0.48±0.03、0.65±0.05、0.89±0.05、0.56±0.03)、Beclin1(0.42±0.03、0.59±0.03、0.77±0.05、0.50±0.03)蛋白相对表达量及LC3 Ⅱ/LC3 Ⅰ(0.74±0.08、1.53±0.13、2.44±0.12、0.96±0.09)均高于对照组(0.32±0.03、0.23±0.03、0.26±0.04)(P＜0.05);右美托咪定低、中、高浓度组p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt及Bcl-2蛋白相对表达量均依次降低(P＜0.05),Bax、Beclin1蛋白相对表达量及LC3Ⅱ/L.C3 Ⅰ均依次升高(P＜0.05);通路激活组p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt及Bcl-2蛋白相对表达量均高于右美托咪定中、高浓度组(P＜0.05),均低于右美托咪定低浓度组(P＜0.05);通路激活组Bax、Beclin1蛋白相对表达量及LC3Ⅱ/LC3 Ⅰ均低于右美托眯定中、高浓度组(P＜0.05),均高于右美托咪定低浓度组(P＜0.05).结论 右美托咪定可促进宫颈癌HeLa细胞凋亡及自噬,且呈剂量依赖性,其机制可能与抑制PI3K/Akt通路有关.
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