【摘 要】
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为研究人骨肉瘤细胞(U2-OS)表达人白介素12(hIL-12)的可行性,利用Lipofectamine 2 000将重组质粒转染至U2-OS细胞中,采用实时荧光定量PCR法及Weste-blot法检测人白介素(hIL-1
【机 构】
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湖北省荆门市第二人民医院,湖北荆门,448000
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为研究人骨肉瘤细胞(U2-OS)表达人白介素12(hIL-12)的可行性,利用Lipofectamine 2 000将重组质粒转染至U2-OS细胞中,采用实时荧光定量PCR法及Weste-blot法检测人白介素(hIL-12)在细胞的表达,并对产物活性进行了验证.将hIL-12成熟肽基因序列5'端添加Hind Ⅲ酶切位点,3'端添加6×His标签及Bam HI酶切位点,再将基因通过5'Hind Ⅲ和3'Bam HI克隆至载体pcDNA3.1上,最后转化大肠杆菌DH5α,挑取转化子并提取质粒进行酶切及测序验证.获得重组表达质粒pcDNA3.1-hIL-12,利用Lipofectamine 2000将重组质粒转染至U2-OS细胞中,采用实时荧光定量PCR法及Weste-blot法检测hIL-12的表达.High affinity Ni-charged resin纯化hIL-12,动物体内验证其抗肿瘤活性.实验研究显示,通过基因转染技术可以将hIL-12基因导入到人U2-OS细胞,组成hIL-12的人源表达系统,经验证,hIL-12基因在U2-OS细胞内表达相应蛋白.活性研究显示,荷瘤小鼠体内IFNγ水平显著升高,脾脏细胞毒T细胞(CTL)活性及自然杀伤性细胞(CK)活性均显著升高,肿瘤重量也明显降低.
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