观察96序列相似的家庭成员B(FAM96B)对肝癌HepG2细胞增殖、凋亡及侵袭转移的影响。
方法分别采用实时荧光定量聚合酶链反应(Real-time PCR)和蛋白质印迹法(Western blot)检测FAM96B在L02和HepG2细胞中的mRNA及蛋白表达量并比较其差异。构建pcDNA3.1-FAM96B真核表达载体并转染至HepG2细胞中,采用噻唑蓝(MTT)检测各组细胞在0、24、48、72、96 h的增殖能力。分别采用流式细胞技术(FCM)检测细胞凋亡、划痕实验检测细胞迁移能力、Transwell检测细胞侵袭能力。选取10只4~5周龄雄性BALB/c-nu/nu小鼠,构建肿瘤模型,随机分为对照组和FAM96B组。分别注入0.3 ml 1×1010个pcDNA3.1-HepG2细胞和pcDNA3.1-FAM96B HepG2细胞。每隔3 d测量皮下瘤的重量和体积,观察30 d后处死。应用SPSS 21.0软件进行统计,计量资料采用均值±标准差(Mean±SD)表示,两组间均数比较采用t检验。
结果FAM96B在HepG2细胞中的mRNA表达量显著低于L02细胞(t=25.343,P<0.01),同时,FAM96B在HepG2细胞中的蛋白表达量显著低于L02细胞。与对照组比较,FAM96B组细胞增殖能力显著减弱(P<0.01)。FAM96B组的凋亡率显著高于对照组[(8.61±1.05)%比(47.34±4.82)%,t=23.544,P<0.01]。FAM96B组的迁移能力显著低于对照组[(222.33±32.78) μm比(284.13±46.18) μm,t=4.227,P<0.01]。FAM96B组侵袭能力显著低于对照组[(45.47±4.05)个比(101.13±5.54)个,t=31.413,P<0.01]。裸鼠皮下成瘤模型中,FAM96B组裸鼠瘤体重量及体积与对照组比较明显减小(t体积=0.610,t重量=7.186,P均<0.05)。
结论FAM96B在肝癌HepG2细胞中低表达,上调FAM96B表达可抑制HepG2细胞增殖、侵袭及转移并诱导其凋亡,且可抑制裸鼠皮下成瘤模型中的肿瘤生长。