目的探讨miR-101-3p对肝癌细胞增殖凋亡的影响及其对靶基因性别决定区Y框蛋白9(sex determining region Y-box 9,SOX9)的调控作用。方法肝癌细胞转染miR-101-3p模拟物(miR-101-3p mimics组)、模拟物阴性对照(mimics control组)、SOX9小干扰RNA(SOX9 siRNA组)、siRNA对照(siRNA control组),同时以只加入转染试剂的细胞为对照组,RT-PCR检测细胞中miR-101-3p水平,噻唑蓝(MTT)检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Western blotting检测细胞中活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)、SOX9表达,靶基因预测库预测miR-101-3p靶基因,荧光素酶报告基因鉴定靶基因。结果miR-101-3p mimics能够促进肝癌细胞中miR-101-3p表达,SOX9 siRNA能够抑制肝癌细胞中SOX9的表达。miR-101-3p mimics组细胞凋亡率高达(35.69±5.27)%,细胞存活率只有(76.34±4.63)%,细胞中Cleaved Caspase-3表达增多。靶基因预测库和双荧光素酶报告基因预测并鉴定miR-101-3p的靶基因是SOX9。miR-101-3p mimics能够抑制SOX9 mRNA和蛋白表达。SOX9 siRNA组细胞中SOX9蛋白表达下降,Cleaved Caspase-3蛋白水平升高,细胞凋亡率高达(29.58±2.58)%,而细胞存活率只有(69.47±5.26)%。结论miR-101-3p能够负调控靶基因SOX9,从而促进肝癌细胞凋亡,抑制肝癌细胞增殖。