论文部分内容阅读
目的:观察小分子RNA沉默HMGA2在胃癌细胞株MKN-45的表达,研究HMGA2对Wnt/β-Catenin通路中主要分子β-Catenin以及下游靶分子c-myc、CyclinD1的表达量及转录活性的影响,探讨HMGA2对Wnt/β-Catenin信号转导通路的影响.方法:构建针对人HMGA2基因的shRNA真核表达载体,瞬时转染人胃癌细胞株MKN-45,用RT-PCR、Western blot分别检测转染后shHMGA2组、scrambled组和空白对照组细胞中HMGA2 mRNA和蛋白的表达情况,评估抑制效应;分别检测转染后3组细胞中的β-Catenin、c-myc、Cyclin D1 mRNA和蛋白的表达水平.结果:转染48h后shHMGA2-1组的HMGA2 mRNA相对表达量(0.58±0.07),与shHMGA2-2组(0.92±0.13)、shHMGA2-3组(0.90±0.16)、scrambled组(1.07±0.14)及空白对照组(1.19±0.09)相比有统计学意义(P<0.05),其他4组相比无统计学意义(P>0.05);转染48h后shHMGA2-1组的HMGA2沉默效果最好,HMGA2 mRNA表达明显下降,抑制率51.3%;故选用质粒shHMGA2-1继续后续实验;Westernblot结果显示转染72h后shHMGA2-1组HMGA2蛋白相对表达量为(0.11±0.03),与scrambled组(0.48±0.12)及空白对照组(0.55±0.08)相比有统计学意义(P<0.05),HMGA2蛋白表达明显下降,抑制率80%;沉默干扰HMGA248h和72h后,β-Caten in mRNA和蛋白表达水平在空白对照组(1.07±0.02,0.69±0.04)与scrambled组(0.91±0.02,0.67±0.10)中无明显差异(P>0.05),而shHMGA2-1组(0.53±0.04,0.44±0.05)较之两组有明显的下降(P<0.05);shHMGA2-1组中c-myc mRNA和蛋白相对表达量为(0.39±0.04,0.25±0.07)较之空白对照组(0.88±0.05,0.75±0.09)、scrambled组(0.84±0.03,0.66±0.10)有明显下降(P<0.05),后两组相比较无统计学意义(P>0.05);shHMGA2-1组中Cyclin D1 mRNA和蛋白相对表达量为(0.31±0.02,0.12±0.01)较之空白对照组(0.52±0.03,0.73±0.12)、scrambled组(0.51±0.01,0.63±0.07)有明显下降(P<0.05),后两组相比较无统计学意义(P>0.05).结论:RNAi载体能有效地抑制HMGA2在胃癌细胞株MKN-45中的表达,沉默干扰HMGA2抑制了Wnt/β-Catenin通路中的主要分子β-Catenin以及下游靶分子c-myc、Cyclin D1的表达,HMGA2基因可能是通过调控Wnt/β-Catenin通路对胃癌细胞生长和凋亡发挥作用的.