DNA未知片段APCR克隆的优化

来源 :植物生理学通讯 | 被引量 : 0次 | 上传用户：lvbocai

【摘要】

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用锚定PCR(APCR)技术对未知的小麦淀粉合成关键酶基因gbss Ⅰ和sbeⅡa启动子序列进行扩增.通过对APCR反应进行优化,获得了gbssⅠ启动子序列(4.1kb)和sbeⅡa启动子序列(3.1kb)

【作者】

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苗红梅岳彩鹏赵永英

【机构】

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河南省农业科学院生物技术研究所,郑州大学生物工程系

【出处】

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植物生理学通讯

【发表日期】

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2005年4期

【关键词】

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APCR DNA未知片段小麦启动子序列 PCR克隆优化 DNA 片段 GBSS 变性温度

【基金项目】

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河南省高校杰出科研创新人才工程项目

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用锚定PCR(APCR)技术对未知的小麦淀粉合成关键酶基因gbss Ⅰ和sbeⅡa启动子序列进行扩增.通过对APCR反应进行优化,获得了gbssⅠ启动子序列(4.1kb)和sbeⅡa启动子序列(3.1kb).结果表明:减少模板加入量(由1μL降低至1/100μL)和增大反应体积(由50μL增到100μL)均可在一定程度上减少非特异的结果出现;升高变性温度(由94℃提高到98℃)和延伸温度(由55℃提高到72℃)并延长延伸时间则能有效地消除APCR中的非特异性条带.

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