甲状旁腺素相关蛋白cDNA的克隆及其在大肠杆菌中的表达

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采用RTPCR方法从中国人肾癌细胞株中克隆到甲状旁腺素相关蛋白(Parathyroidhormnoerelatedprotein,PTHrP)cDNA,其核苷酸序列与国外发表资料相比,有6个核苷酸不同,其中仅92位密码子的不同导致氨基酸变异,即由脯氨酸变为丝氨酸。将克隆的PTHrPcDNA插到原核表达载体pET3a的T7噬菌体启动子下游,转化大肠杆菌后得到高效表达,并经Westernblot和生物学活性检测对表达产物作了鉴定。 The cDNA of parathyroid hormone related protein (PTHrP) was cloned from Chinese human renal cell carcinoma cell line by RTPCR. The nucleotide sequence of the cDNA was 6 nucleotides different from that published in foreign countries. The difference in codon 92 results in a variation in amino acids, from proline to serine. The cloned PTHrPcDNA was inserted into the prokaryotic expression vector pET  3a downstream of the T7 phage promoter, transformed into E. coli after high expression, and the expression product was identified by Western blot and biological activity test.
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